International Journal of Reproductive BioMedicine

en اثرات اپی ژنتیکی بیسفنول A بر روی سلول های گرانولوزای فولیکول های موش در شرایط کشت آزمایشگاهی: یک مطالعه تجربی Epigenetic effects of Bisphenol A on granulosa cells of mouse follicles during in vitro culture: An experimental study Reproductive Genetics Original Article Original Article <div style="text-align: justify;">مقدمه: بیسفنول A (BPA)، ترکیب شیمیایی مختلکننده اندوکراین، یک سم دستگاه تولیدمثل است. سلولهای گرانولوزا وظایف مهمی در تکوین فولیکول دارند و لیگاند KIT (KITL) و آنتیمولرین هورمون (AMH) از مولکولهای زیستی ضروری هستند که توسط آنها طی فولیکوژنز تولید میشوند. هدف: به دلیل استفاده گسترده از BPA و اثرات اپیژنتیکی بالقوه آن، این مطالعه به بررسی تأثیر BPA روی متیلاسیون پروموتر ژنهای amh و kitl در سلولهای گرانولوزای موش پرداخت. مواد و روش ها: فولیکولهای پرهآنترال از تخمدانهای موشهای نابالغ جدا شدند و برای هشت روز کشت داده شدند. سپس، فولیکولها باBPA  50 و 100 میکرومولار و %01/0 (v/v) اتانول برای 24 و 72 ساعت تیمار شدند. رشد و دژنراسیون فولیکولها و تشکیل حفره آنتروم در آنها بررسی شد. سلولهای گرانولوزا به صورت مکانیکی جدا شدند و DNA استخراج شده از آنها با بیسولفیت سدیم تیمار شد. نواحی پروموتری ژنهای amh و kitl با PCR و تعیین توالی مطالعه شدند. نتایج: BPA منجر به تغییر معناداری در بقاء فولیکول و تشکیل آنتروم نشد (41/0 p =). با این حال، کشت در حضور 100 میکرومولار BPA، اثر مهاری روی رشد فولیکولها داشت. پیش از تیمار با BPA، CpG پروموترهای kitl و amh به ترتیب، به حالت غیرمتیله و متیلاسیون جزئی بودند. درصد 5-متیل سیتوزین در پروموتر amh در غلظت 100 میکرومولار BPA کاهش یافت، در حالی که این مقدار از BPA  تأثیری بر متیلاسیون پروموتر kitl نداشت. نتیجه گیری: BPA در غلظتهای بالاتر تأثیر مهاری بر رشد فولیکول دارد. بعلاوه، به نظر میرسد که اثر اپیژنتیکی BPA به دمتیلاسیون جایگاههای CpG محدود میشود.</div> Background: Bisphenol A (BPA), a synthetic endocrine-disrupting chemical, is a reproductive toxicant. Granulosa cells have significant roles in follicle development, and KIT ligand (KITL) and Anti-Müllerian hormone (AMH) are essential biomolecules produced by them during folliculogenesis. Objective: Due to the widespread use of BPA and its potential epigenetic effects, this study examined the impact of BPA on promoter methylation of amh and kitl genes in mouse granulosa cells. Materials and Methods: Preantral follicles were isolated from ovaries of immature mice and cultured for eight days. Then, follicles were treated with 50 and 100 μM of BPA, and 0.01% (v/v) ethanol for 24 and 72 hr. Growth and degeneration of follicles and antrum formation were analyzed. The granulosa cells were isolated mechanically, and their extracted DNA was treated with sodium bisulfite. The promoter regions of the amh and kitl were analyzed with PCR and sequencing. Results: BPA did not change follicle survival and antrum formation significantly (p = 0.41). However, the culture in the presence of 100 μM BPA had an inhibitory effect on growth. Before BPA treatment, the CpG of the kitl and amh promoters were unmethylated and partially methylated, respectively. While the percent of 5mC in the amh promoter reduced at 100 μM of BPA, it did not alter the kitl promoter methylation. Conclusion: BPA at higher concentrations has an inhibitory effect on follicle growth. Moreover, it seems that the epigenetic impact of BPA restricts to the demethylation of CpG sites. بیسفنول A, متیلاسیون DNA, سلول‌های گرانولوزا Bisphenol A, DNA methylation, Granulosa cells 129 136 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1255-2&slc_lang=en&sid=1 Aylin Jamali Khaghani niliya69.kh@gmail.com 0000-0002-3508-6946 No School of Biology, Damghan University, Damghan, Iran. Parisa Farrokh farrokh@du.ac.ir 0000-0003-4272-9281 Yes School of Biology, Damghan University, Damghan, Iran. Institute of Biological Sciences, Damghan University, Damghan, Iran. Saeed Zavareh zavareh.s@du.ac.ir 0000-0002-9400-586X No School of Biology, Damghan University, Damghan, Iran. Institute of Biological Sciences, Damghan University, Damghan, Iran.