International Journal of Reproductive BioMedicine

بررسی آزمایشگاهی پتانسیل درمانی محیط شرطی سلول‌های بنیادی مزانشیمی در درمان اندومتریوز با هدف قرار دادن آپوپتوز و مهاجرت سلولی In vitro exploration of the therapeutic potential of mesenchymal stem cell conditioned medium in endometriosis treatment by targeting apoptosis and cellular migration <div style="text-align: justify;">مقدمه: آندومتریوز، یک اختلال شایع زنانه‌ است که شامل وجود بافت آندومتر در خارج از رحم بوده و منجر به ناباروری و درد مزمن می‌شود. آپوپتوز (مرگ برنامه‌ریزی‌شده سلولی) نامنظم و مهاجرت غیرطبیعی سلول‌ها از ویژگی‌های پاتولوژیک کلیدی آن هستند. با توجه به محدودیت‌های درمان‌های فعلی، استراتژی‌های نوین مانند محیط‌های شرطی (CM) مشتق از سلول‌های بنیادی مزانشیمی (MSC) به دلیل غنای ترشحات، مورد بررسی قرار گرفته‌اند. هدف: بررسی اثرات محیط‌های شرطی (CM) از سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از خون قاعدگی زنان سالم (MenSCs-CM) و سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی انسانی (ADSCs-CM) بر آپوپتوز و مهاجرت در سلول‌های MenSCs افراد مبتلا به آندومتریوز. مواد و روش ها: این مطالعه به صورت تحقیقات آزمایشگاهی (in vitro) انجام شد. سلول‌های MenSCs آندومتریوزی از زنان نابارور (35-25 سال) از طریق خون قاعدگی جدا شدند. سلول‌های تک‌هسته‌ای تا پاساژ ۳ کشت داده شدند و با استفاده از فلوسایتومتری تعیین هویت شدند (مثبت برای CD29، CD44، CD73، CD105؛ منفی برای CD34، CD38، CD45). محیط‌های شرطی به‌طور جداگانه از MenSCs اهداکننده سالم و ADSCs تهیه شدند. سلول‌های MenSCs افراد مبتلا به آندومتریوز به‌طور مستقل با MenSCs-CM و ADSCs-CM تیمار شدند. مهاجرت سلولی با آزمون خراش (scratch assay)، آپوپتوز با روش Annexin V، و سطوح mRNA ژن Bax و نسبت Bax به Bcl2 با استفاده از Real-time PCR ارزیابی شدند. نتایج: هم ADSCs-CM و هم MenSCs-CM به‌طور معنی‌داری آپوپتوز اولیه و ثانویه را در سلول‌های MenSCs آندومتریوزی افزایش دادند (001/0 > p). آزمون‌های خراش، کاهش معنی‌داری در مهاجرت MenSCs را در ساعت های ۲۴ (001/0 > p)، ۴۸ (003/0 = p) و ۷۲ (001/0 > p) نشان دادند. بیان ژن افزایش معنی‌دار در mRNA ژن Bax (013/0 = p) و نسبت Bax/Bcl2 (044/0 = p) را نشان داد. نتیجه گیری: محیط‌های شرطی مشتق از ADSCs و MenSCs زنان سالم، آپوپتوز را تقویت کرده و مهاجرت MenSCs آندومتریوزی را در شرایط آزمایشگاهی مهار می‌کنند و استراتژی‌های درمانی بالقوه‌ای را برای آندومتریوز مطرح می‌سازند.</div> <div style="text-align: justify;">Background: Endometriosis, a common gynecological disorder involving ectopic endometrial tissue, leads to infertility and chronic pain. Dysregulated apoptosis and abnormal cell migration are key pathological features. Given current treatment limitations, novel strategies like mesenchymal stem cells (MSC) derived conditioned media (CM) are explored due to their rich secretome. Objective: To investigate the effects of CM from healthy menstrual blood-derived MSCs (MenSCs-CM) and human adipose tissue-derived MSCs (ADSCs-CM) on apoptosis and migration in endometriotic MenSCs. Materials and Methods: This in vitro study involved the isolation of endometriotic MenSCs from infertile women (25-35 yr) via menstrual blood. Mononuclear cells were cultured to passage 3, and characterized using flow cytometry (CD29, CD44, CD73, CD105 positive; CD34, CD38, CD45 negative). CM was prepared separately from healthy donor MenSCs and ADSCs. Endometriotic MenSCs were treated with healthy MenSCs-CM and ADSCs-CM independently. Cell migration (scratch assay), apoptosis (Annexin V), and Bax mRNA levels and Bax/Bcl‑2 ratio (real-time polymerase chain reaction) were evaluated. Results: Both ADSCs-CM and MenSCs-CM significantly increased during early and late apoptosis in endometriotic MenSCs (p < 0.001). Scratch assays showed significantly decreased MenSCs migration at 24, 48, and 72 hr (p < 0.001, p = 0.003, p < 0.001, respectively). Gene expression revealed significant increases in Bax mRNA (p = 0.013) and the Bax/Bcl‑2 ratio (p = 0.044). Conclusion: CM from ADSCs and MenSCs of healthy women enhances apoptosis and inhibits endometriotic MenSCs migration in vitro, suggesting potential therapeutic strategies for endometriosis.</div> آندومتریوز, سلول‌های بنیادی مزانشیمی, مهاجرت سلولی, آپوپتوز, محیط های کشت شرطی. Endometriosis, Mesenchymal stem cells, Cell migration, Apoptosis, Conditioned culture media. 117 126 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A--2907-3&slc_lang=&sid=1 Hassan Hedayatnia hassanhedayatnia_3@yahoo.com; Naserkalhor@acecr.ir; naserkalhor@acecr.ir 0009-0005-3053-3742 Yes Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Qom Branch, Qom, Iran. Naser Kalhor naserkalhor@gmail.com 0000-0001-8870-8035 No Department of Mesenchymal Stem Cells, Research Center, Academic Center for Education, Culture and Research (ACECR), Qom Branch, Qom, Iran.