International Journal of Reproductive BioMedicine

en ارزیابی بیان ژن های اختصاصی سلول های زایا در سلول های شبه سلول های زایای بدست آمده از سلول های بنیادی جنینی موش تحت القا با پروتئین شکل دهنده استخوانی 4 (BMP4) در شرایط آزمایشگاه Evaluation of specific germ cell genes expression in mouse embryonic stem cell-derived germ cell like cells treated with bone morphogenetic protein 4 in vitro Original Article Original Article مقدمه: پروتئین شکلدهنده استخوانی 4 (BMP4) یک مولکول قابل توجه است که سبب شروع تمایز و اثرات چند جانبه بر روی سلولهای بنیادی جنینی و جنین میشود. هدف: در این مطالعه با استفاده از مدل تمایز آزمایشگاهی القا تمایز از سلولهای بنیادی جنینی به سلولهای زایا با استفاده از BMP4 انجام شد. موارد و روشها: ما از رده سلولهای بنیادی جنینی موشی Oct4-GFP برای تشکیل تجمعات جسم جنین دو روزه استفاده کردیم. سپس سلولهای        تکسلولی شده جسم جنینی به مدت چهار روز کشت شدند. پس از انجام تست MTT و ارزیابی بیان ژنهای Vasa و Riken با استفاده از RT-PCR real time در 6 غلظت مختلف، دز ng/mL 12/5 به عنوان دز بهینه BMP4 تعیین شد. میزان بیان ژنهایFkbp6, Mov10l1,Riken ,Tex13, Mvh, Scp3, Stra8, Oct4 ارزیابی شد. فلوسایتومتری و رنگآمیزی ایمونوهیستوشیمی جهت تأیید یافتههای ریلتایم انجام شد. نتایج: در این مطالعه BMP4 توانست میزان بیان بعضی از ژنهای سلولهای زایا را نسبت به گروه کنترل افزایش دهد. در گروه +BMP4 میزان بیان ژن (0/001≥p) Riken و (0/001≥p) Vasa با تفاوت معنیداری نسبت به گروه کنترل افزایش یافت. همچنین Tex13، (0/22p=)Mov1011  (0/61p=)Scp3، (0/90=p)Fkbp6 ، (0/10p=) و (0/08p=) Stra8 نسبت به گروه کنترل افزایش یافتند ولی این تفاوت معنیدار نبود. نتایج آزمون فلوسایتومتری نشان داد میانگین سلولهای Mvh مثبت در گروه +BMP4 در مقایسه با گروههای ESCs، –BMP4 و EB بیشتر بود به ترتیب    (0/001p=، 0/02 p=، 0/03p=). نتیجه گیری: کاهش میزان بیان ژن Oct4 به عنوان یک فاکتور پرتوانی در راستای بیان مارکرهای میوزی این فرضیه ایجاد میشود که BMP4 سبب تمایز سلولهای بنیادی جنینی به سلولهای شبه سلولهای زایا درمرحله تقسیم اول میوزی شد. Background: Bone morphogenetic protein 4 (BMP4) is a significant signaling molecule that involves in initiating of differentiation and performs multifunctional effects on embryonic stem cells (ESCs) and embryos. Objective: The goal of the present study was to evaluate an in vitro differentiation model of mouse embryonic stem cells into germ cells, using BMP4. Materials and Methods: in this experimental study, we used Oct4-GFP mouse ESCs to form embryoid body (EB) aggregations for two days. Then, single cells from EB were cultured for four days with BMP4. Using MTT assay and gene expression levels for evaluation of Mvh and Riken by real-time RT-PCR of six concentrations, 12.5 ng/ ml BMP4 was determined as an optimized dose. Then, the expression level of Fkbp6, Mov10l1, 4930432K21Rik, Tex13, Mvh, Scp3, Stra8, Oct4 were evaluated. Flow cytometry and immunostaning were used to confirm the findings of the real-time RT-PCR. Results: In the +BMP4 group, the genes encoding Riken (p≤0.001) and Mvh (p≤0.001) were found to be increased with significant differences compared with the control group. Mov10l1 (p=0.22), Tex13 (p=0.10), Fkbp6 (p=0.90), Scp3 (p=0.61) and Stra8 (p=0.08) were up-regulated without significance differences compared with control group. Flow cytometry analysis showed that the mean number of Mvh-positive cells in the +BMP4 group was greater when compared with ESCs, -BMP4 and EB groups (p=0.03, p≤0.001, p=0.02, respectively). Conclusion: Down-regulation of Oct4, expression of germ cells genes and meiosis markers expression raise this hypothesis that ESCs were differentiated by BMP4, and may be introduced into the first meiosis as germ cell-like cells. پروتئین تغییر شکل دهنده استخوانی 4, سلول های بنیادی جنینی, سلول زایا, جسم جنینی. Bone morphogenetic protein, Embryonic stem cells, Germ cells, Embryoid body 507 518 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-549-147&slc_lang=en&sid=1 Maryam Gholamitabar Tabari مریم غلامی تبار طبری alijorsara@yahoo.com 0000-0003-2525-6881 No Infertility and Reproductive Health Research Center, Health Research Institute, Babol University of Medical Science, Babol, Iran مرکز تحقیقات بهداشت باروری و ناباروری، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران Seyed Gholam Ali Jorsaraei سید غلامعلی جورسرایی alijorsara@yahoo.com 0000-0001-5440-6792 Yes Infertility and Reproductive Health Research Center, Health Research Institute, Babol University of Medical Science, Babol, Iran. مرکز تحقیقات بهداشت باروری و ناباروری، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران Mohammad Ghasemzadeh-Hasankolaei محمد قاسم زاده حسن کلایی alijorsara@yahoo.com 0000-0003-2053-5566 No Infertility and Reproductive Health Research Center, Health Research Institute, Babol University of Medical Science, Babol, Iran. مرکز تحقیقات بهداشت باروری و ناباروری، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران Ali Asghar Ahmadi علی اصغر احمدی alijorsara@yahoo.com 0000-0003-2286-534x No Infertility and Reproductive Health Research Center, Health Research Institute, Babol University of Medical Science, Babol, Iran مرکز تحقیقات بهداشت باروری و ناباروری، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران Neda Mahdinezhad Gorji ندا مهدی نژاد گرجی alijorsara@yahoo.com No Infertility and Reproductive Health Research Center, Health Research Institute, Babol University of Medical Science, Babol, Iran. مرکز تحقیقات بهداشت باروری و ناباروری، پژوهشکده سلامت، دانشگاه علوم پزشکی بابل، بابل، ایران