en تولید لاین های جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی (یزد 1-3) و انجماد شیشه ای آنها با استفاده از ابزار کرایوتک و کرایووین: یک گزارش از منابع آزمایشگاهی Stem Cell & Cloning Original Article Original Article <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مقدمه: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">فراهم کردن بانک سلولی در مراحل اولیه تکثیر سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی نیازمند یک روش انجماد سلولی بهینه می</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">باشد. انجماد شیشه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ای به عنوان یک روش بهینه در حفظ و ذخیره سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های زایا و رویان در روش</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های کمک باروری مورد استفاده قرار می&shy;گیرد. همچنین انجماد شیشه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ای با استفاده از نی</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های کشیده شده برای حفظ سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی نیز استفاده شده است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">تولید و شناسایی لاین</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های جدید سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی و انجماد شیشه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ای آنها با استفاده از ابزار کرایوتک و کرایووین.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش&shy; ها: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">با استفاده از روش کشت در قطره</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های درمقیاس میکرو، لاین</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های جدید سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی بر روی لایه تغذیه&shy;کننده متشکل از سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های فیبروبلاست جنینی موشی تولید شدند، که بعدا بر روی دو نوع لایه تغذیه&shy;کننده موشی و انسانی (سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های فیبروبلاست جنینی موشی و سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های فیبروبلاست پوست ختنه انسانی) تکثیر پیدا کردند. برای تهیه بانک سلولی اصلی برای هر لاین سلولی 100 عدد از ابزار کرایوتک و کرایووین جهت انجماد شیشه&shy;ای استفاده شد. همچنین فلاسک</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های حاصل از تکثیر سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی یزد با روش قدیمی انجماد آهسته ذخیره شدند.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">پرتوانی لاین</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های سلولی یزد با استفاده از بررسی بیان ژن</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های مرتبط با پرتوانی و شناساگرهای اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت. توانایی تمایزی &nbsp;سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ها با استفاده از روش تشکیل اجسام شبه رویانی و همچنین روش کشت تک لایه و بررسی بیان ژن</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های تمایزی مربوط به سه لایه جنینی و سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های زایا در سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های تمایز یافته مورد ارزیابی قرار گرفت. جهت بررسی محتوای کروموزومی سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ها از روش کاریوتایپ استفاده شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه&shy; گیری: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ابزار کرایوتک و کرایووین مورد استفاده قرار گرفته جهت انجماد شیشه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ای در مراحل ابتدایی تولید لاین</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های جدید سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی رویانی انسانی ابزار مناسبی برای ذخیره این سلول</span></span><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ها می&shy;باشند.</span></span> <strong>Background:</strong> Cell banking of initial outgrowths from newly derived human embryonic stem cells (hESCs) requires an efficient freezing method. Vitrification is used for the preservation of gametes and early embryos in assisted reproduction techniques (ART). Moreover, vitrification was applied for cryopreservation of hESCs using open pulled straws.<br> <strong>Objective:</strong> To derive and characterize new hESC lines and then use Cryotech and Cryowin tools for their vitrification.<br> <strong>Materials and Methods:</strong> Human ESC lines were generated in a microdrop culture system using mouse embryonic fibroblasts (MEFs) as the feeder layer; this was later scaled up using both MEFs and Yazd human foreskin fibroblasts batch 8 (YhFF#8). To bank the cell lines, master cell banks of 100 Cryotech and Cryowin tools were produced for each individual cell line using the vitrification method; flasks of hESC lines were also cryopreserved using a conventional slow-freezing method.<br> <strong>Results:</strong> The pluripotency of cell lines was assessed by their expression of pluripotency-associated genes (<em>OCT4/POU5F1</em>,<em> NANOG</em>, and<em> SOX2</em>) and markers such as SSEA4, TRA-1-60, and TRA-2-49. Their <em>in vitro</em> capacity to differentiate into germ layers and germ cells using embryoid body (EB) formation and monolayer culture was assessed by screening the expression of differentiation-associated genes. The chromosomal constitution of each hESC line was assessed by G-banding karyotyping.<br> <strong>Conclusion:</strong> Cryotech and Cryowin tools used to vitrify new hESCs at an early stage of derivation is an efficient method of preserving hESCs.<br> &nbsp;<br> &nbsp; تولید, سلول های بنیادی رویانی انسانی, فیبروبلاست پوست ختنه انسانی, میکرودراپ, انجماد شیشه ای Derivation, Human embryonic stem cells, Human foreskin fibroblast, Microdrop, Vitrification 891 906 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-899-1&slc_lang=en&sid=1 Fatemeh Akyash fakyash@gmail.com 0000-0003-1277-4858 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Somayyeh Sadat Tahajjodi s.tahajjodi@yahoo.com 0000-0001-7386-3753 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Ehsan Farashahi Yazd ehsanfarashahi@gmail.com 0000-0003-1122-0626 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Fatemeh Hajizadeh-Tafti fhajizade69@yahoo.com 0000-0003-3067-0534 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran Fatemeh Sadeghian-Nodoushan fsadeghian@gmail.com 0000-0003-2767-7882 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran Jalal Golzadeh golzadehjalal@gmail.com 0000-0002-3425-9526 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran Hassan Heidarian Meimandi heidarianmh@gmail.com 0000-0001-6283-9053 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Harry Moore h.d.moore@sheffield.ac.uk 0000-0002-1541-6055 No Department of Biomedical Sciences, Centre for Stem Cell Biology, University of Sheffield, Western Bank, Alfred Denny Building, Sheffield S10 2TN, UK. Behrouz Aflatoonian b.aflatoonian@gmail.com 0000-0002-7250-9813 Yes Department of Advanced Medical Sciences and Technologies, School of Paramedicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran.