International Journal of Reproductive BioMedicine

en مقایسه ناپایداری کروموزومی آمینوسیت های انسانی در کشت های اولیه و طولانی مدت تحت تاثیر دو محیط کشت AmnioMAX II و DMEM Comparison of chromosomal instability of human amniocytes in primary and long-term cultures in AmnioMAX II and DMEM media: A cross-sectional study Reproductive Genetics Original Article Original Article مقدمه: پیشرفتهای اخیر در پزشکی بازساختی گرایش به جستجو برای منابع سلولهای بنیادی پایدار، ایمن و در دسترس با پتانسیلهای درمانی افزایش داده است. اگر چه پایداری ژنتیکی سلولهای بنیادی که در سلول درمانی بالینی مورد استفاده قرار میگیرند بسیار حائز اهمیت است، اما ارتباط بین گسترش سلولهای بنیادی و ناپایداری کروموزومی (CIN) آنها هنوز به طور کامل روشن نشده است. در جستجو برای منابع قابل اعتماد سلولهای بنیادی، سلولهای مایع آمنیوتیک انسان (hAFCs) میتواند به عنوان یک منبع بالقوه مورد توجه قرار گیرند. هدف: در این تحقیق با استفاده از تستهای سیتوژنتیکی، ناپایداری کروموزومی در آمنیوسیتهای انسانی کشت شده در پاساژهای مختلف و تحت تأثیر دو محیط کشت متفاوت مورد بررسی قرار میگیرد. مواد و روش ها: hAFCs تحت تأثیر دو محیط مختلف شامل AmnioMAX II و DMEM کشت داده شد. در انتها سلولهای تکثیری برای کاریوتایپ G-banding استاندارد روی اسلاید تثبیت و مورد استفاده قرار گرفتند. همچنین سلولهای پیر (در پاساژهای بالاتر) تحت تأثیر دو محیط متفاوت از نظر آنیوپلوییدی و پلیپلوییدی با تکنیک FISH (هیبریدسازی درجا به کمک فلورسنت) با استفاده از دو مجموعه پروب شاملPID I (X-13-18-21)  و  PID II (Y-15-16-22)مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج: نتایج حاصل از کشت 650 مورد نمونه مایع آمنیون تا حداکثر 3 پاساژ نشاندهنده عدم وجود ناپایداری کروموزومی ناشی از کشت بود بجزء 6 مورد (در کمتر از 1% از سلولهای مورد بررسی) که در آنها مواردی از پلیپلوییدی شامل موزائیک دیپلوئید- تریپلویید و دیپلوئید- تتراپلوئید مشاهده شده است. علاوه بر این، ارزیابی نرخ آنیوپلوییدی در hAFC های پیر نشان داد که میزان کل ناهنجاریهای کروموزومی سلولهای مورد بررسی در محیط AmnioMAX II حدود 4/4% و در محیط DMEM حدود 9/9% گزارش شد. نتیجه گیری: hAFC ها ناپایداری کروموزومی پایینی را در هر دو وضعیت پرولیفراتیو و پیری نشان میدهند، بنابراین میتوان آنها را به عنوان یک کاندید و منبع مناسب سلولهای بنیادی بالقوه در پزشکی بازساختی مورد توجه قرار داد.     Background: The genomic stability of stem cells to be used in cell therapy and other clinical applications is absolutely critical. In this regard, the relationship between in vitro expansion and the chromosomal instability (CIN), especially in human amniotic fluid cells (hAFCs) has not yet been completely elucidated. Objective: To investigate the CIN of hAFCs in primary and long-term cultures and two different culture mediums. Materials and Methods: After completing prenatal genetic diagnoses (PND) using karyotype technique and chromosomal analysis, a total of 15 samples of hAFCs from 650 samples were randomly selected and cultured in two different mediums as AmnioMAX II and DMEM. Then, proliferative cells were fixed on the slide to be used in standard chromosome G-banding analysis. Also, the senescent cells were screened for aneuploidy considering 8 chromosomes by FISH technique using two probe sets including PID I (X-13-18-21) & PID II (Y-15-16-22). Results: Karyotype and interphase fluorescence in situ hybridization (iFISH) results from 650 patients who were referred for prenatal genetic diagnosis showed that only 6 out of them had culture- derived  CIN as polyploidy, including mosaic diploid-triploid and diploid-tetraploid. Moreover, the investigation of aneuploidies in senesced hAFCs demonstrated the rate of total chromosomal abnormalities as 4.3% and 9.9% in AmnioMAX- and DMEM-cultured hAFCs, respectively.  Conclusion: hAFCs showed a low rate of CIN in two AmnioMAX II and DMEM mediums and also in the proliferative and senescent phases. Therefore, they could be considered as an attractive stem cell source with therapeutic potential in regenerative medicine. <div></div> کلید واژه ها: سلولهای مایع آمنیوتیک انسان, بیثباتی کروموزومی, موزاییسم کاذب, آمنیوسنتز, پزشکی بازساختی. Human amniotic fluid cells, Chromosomal instability, Pseudomosaicism, Amniocentesis, Replicative senescence. 885 898 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1088-1&slc_lang=en&sid=1 Seyed Mehdi Hoseini sm_hoseini@outlook.com 0000-0001-8759-2712 Yes Department of Biology, Faculty of Science, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran. Biotechnology Research Center, International Campus, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences and Health Services, Yazd, Iran. Fateme Montazeri 0000 0002 7739 5982 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Maryam Moghaddam-Matin 0000-0002-7949-7712 No Department of Biology, Faculty of Science, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran. Ahmad Reza Bahrami 0000-0001-9122-7216 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Hassan Heidarian Meimandi 0000-0002-0089-8004 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Saeed Ghasemi-Esmailabad 0000-0002-9652-8699 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Seyed Mehdi Kalantar smkalantar@yahoo.com 0000-0002-6994-6449 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran.