International Journal of Reproductive BioMedicine
International Journal of Reproductive BioMedicine
IJRM
Medical Sciences
http://ijrm.ir
1
admin
2476-4108
2476-3772
10.29252/ijrm
en
jalali
1400
1
1
gregorian
2021
4
1
19
4
online
1
fulltext
en
نگه داری طولانی مدت داربست بیضه ای برای استفاده در مهندسی بافت
Comparison of two methods for prolong storage of decellularized mouse whole testis for tissue engineering application: An experimental study
Stem Cell & Cloning
Original Article
Original Article
<div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مقدمه: </span></span></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">داربست</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بیولوژیکی به وسیله سلول­زدایی بافت­ها یا ارگان­ها بدست می­آیند. داربست­های بیولوژیکی مختلفی مانند داربست</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">کبد، ریه، مری، درم و بیضه تولید شده است. کاربرد داربست­ها در مهندسی بافت، نیاز برای روش ذخیره­ای داربست­ها را ایجاد کرده است. </span></span><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span></strong><br>
<strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف: </span></span></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف مطالعه ما مقایسه دو روش برای نگه­داری طولانی مدت داربست</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بیضه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">ای می</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">باشد.</span></span><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span></strong><br>
<strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش­ ها: </span></span></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">در این مطالعه تجربی بیضه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های 20 موش نر هشت هفته کشته شدند و بیضه</span></span><span style="font-size:11.0pt;">­</span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های موش­ها جدا شده و با سدیم دودسیل سولفات و تریتون تیمار شدند. کارآیی فرآیند سلول­زدایی با استفاده از بافت­شناسی و اندازه­گیری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مشخص شد. داربست­های بیضه یا در محلول </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PBS</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">در دمای 4 درجه سانتی­گراد نگه</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">­</span></span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">داری شدند یا با روش انجماد آهسته فریز شده و در نیتروژن مایع ذخیره شدند. رنگ­آمیزی تری کروم ماسون، رنگ­آمیزی آلشین بلو ایمونوهیستوشیمی، اندازه­گیری کلاژن و گلیکوزامینوگلیکان قبل و بعد از 6 ماه ذخیره­سازی انجام شد.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج: </span></span></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">رنگ­آمیزی هماتوکسیلین- ائوزین (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">H&E</span></span><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) نشان داد که پس از اتمام فرآیند سلول­زدایی، سلولی باقیمانده نمانده است. تجزیه و تحلیل محتوای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نشان داد که تقریبا 98% </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">از بافت حذف شده است. ارزیابی بافت­شناسی، حفظ اجزاء ماتریس خارج سلولی در داربست­های تازه و منجمد-ذوب شده را تأیید کرد. اجزاء ماتریس خارج سلولی در داربست­های ذخیره شده در دمای 4 درجه سانتیگراد کاهش یافت. نتایج تست سمیت سلولی با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span> <span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نشان داد که داربست­ها زیست سازگار بوده و تأثیر مضر بر تکثیر سلول­های فیبروبلاست جنینی موش ندارد.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه ­گیری: </span></span></strong><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج ما نشان از برتری روش انجماد آهسته برای ذخیره طولانی مدت داربست­های بیضه دارد.</span></span><br>
<em><span style="font-family:B Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span></em><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:Arial,sans-serif;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span></em></strong></div>
<div style="text-align: justify;"><strong>Background:</strong> Biological scaffolds are derived by the decellularization of tissues or organs. Various biological scaffolds, such as scaffolds for the liver, lung, esophagus, dermis, and human testicles, have been produced. Their application in tissue engineering has created the need for cryopreservation processes to store these scaffolds.<br>
<strong>Objective: </strong>The aim was to compare the two methods for prolong storage testicular scaffolds.<br>
<strong>Materials and Methods:</strong> In this experimental study, 20 male NMRI mice (8 wk) were sacrificed and their testes were removed and treated with 0.5% sodium dodecyl sulfate followed by Triton X-100 0.5%. The efficiency of decellularization was determined by histology and DNA quantification. Testicular scaffolds were stored in phosphate-buffered saline solution at 4ºC or cryopreserved by programmed slow freezing followed by storage in liquid nitrogen. Masson's trichrome staining, Alcian blue staining and immunohistochemistry, collagen assay, and glycosaminoglycan assay were done prior to and after six months of storage under each condition.<br>
<strong>Results:</strong> Hematoxylin-eosin staining showed no remnant cells after the completion of decellularization. DNA content analysis indicated that approximately 98% of the DNA was removed from the tissue (p = 0.02). Histological evaluation confirmed the preservation of extracellular matrix components in the fresh and frozen-thawed scaffolds. Extracellular matrix components were decreased by 4°C-stored scaffolds. Cytotoxicity tests with mouse embryonic fibroblast showed that the scaffolds were biocompatible and did not have a harmful effect on the proliferation of mouse embryonic fibroblast cells.<br>
<strong>Conclusions:</strong> Our results demonstrated the superiority of the slow freezing method for prolong storage of testicular scaffolds.<br>
</div>
انجماد, بیضه, داربست, موش
Cryopreservation, Testis, Scaffold, Mouse.
321
332
http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1303-1&slc_lang=en&sid=1
Nasrin
Majidi Gharenaz
n_majidi_23@yahoo.com