International Journal of Reproductive BioMedicine

en فشار هیدرواستاتیک بلوغ آزمایشگاهی اووسیت‌های حاصل از تخمدان منجمد- ذوب موش را بهبود می‌بخشد Hydrostatic pressure improves in-vitro maturation of oocytes derived from vitrified-warmed mouse ovaries Original Article Original Article مقدمه: موفقیت حفاظت انجمادی دارای محدودیتهایی است و بلوغ آزمایشگاهی برای بهبود نتایج آن بکار میرود. فشار هیدرواستاتیک نقش مهمی در تکامل فولیکولی ایفا میکند. هدف: مطالعه حاضر برای بررسی اثر فشار هیدرواستاتیک (HP) بر بلوغ آزمایشگاهی اووسیت و مرگ سلولی در سلولهای کومولوسی ناشی از تخمدان منجمد-ذوب در موش کوچک طراحی گردید. مواد و روش ها: فولیکولهای پیش تخمکگذاری از تخمدانهای غیر منجمد و منجمد-ذوب موش ماده نژاد NMRI  در محدوده سنی 8-6 هفته گرفته شد و بهطور تصادفی به چهار گروه غیر منجمد (کنترل)، غیر منجمد با اعمال HP (تیمار I)، منجمد-ذوب (تیمار II)، و منجمد-ذوب با دریافت HP (تیمار III) تقسیم گردیدند. فولیکولهای گروههای  Iو  IIIبه مدت 30 دقیقه تحت فشار هیدرواستاتیک (20 میلیمتر جیوه) قرار و تمام گروهها برای مدت 24 ساعت کشت داده شدند و سپس بلوغ آزمایشگاهی اووسیتها ارزیابی گردید. میزان زنده ماندن و آپوپتوز سلولهای کومولوسی و اووسیتها به ترتیب با رنگآمیزی فوق حیاتی هستهای و روش تانل ارزیابی شد. نتایج: اووسیتهای حاصل از فولیکولهای گروههای کنترل (3/1±23/5) و II (4/6±15/003) در صد کمتری از مرحله متافاز II (MII) را نسبت به گروههای I (3/2±32/7) و  III(4/6±25/5) نشان دادند (0/05>p). زنده ماندن سلولهای کومولوسی در گروههای I،  II و III (83/4% ، 83/30% و77/7%) در مقایسه با کنترل (986%) کاهش داشت (0/05>p). ضریب آپوپتوزی سلولهای کومولوسی و مجموعه اووسیت در گروههایI  و III (0/8±10/7 و 0/8±15/3) بالاتر از گروه کنترل (0/5±6/7) و II (0/5± 9/7) بود (05/0>p). نتیجه گیری: نتایج نشان میدهد که HP اثر ملایمی بر مرگ سلولی در سلولهای کومولوسی بدون اثر جانبی بر اووسیت اعمال میکند. هرچند این میتواند به عنوان یک نیروی مکانیکی برای بهبود بلوغ اووسیتی در اووسیتهای ناشی از تخمدان منجمد-ذوب موش بکار رود. <div>Background: Cryopreservation has limited successes and in-vitro maturation is used to improve its results. Hydrostatic pressure (HP) plays an important role in follicular development. Objective: This study was designed to examine the effects of HP on in-vitro maturation of oocytes and cell death in cumulus cells derived from vitrified-warmed mouse ovaries. Materials and Methods: Preovulatory follicles were harvested from non-vitrified and vitrified-warmed 6-8 week-old female NMRI mouse ovaries and randomly assigned to following groups: non-vitrified (control), non-vitrified with HP exposure (treatment I), vitrified-warmed (treatment II) and vitrified-warmed with HP exposure (treatment III). The follicles of treatments I and III were subjected to HP (20 mmHg) for 30 min and after that all groups were cultured for 24h and assessed for in-vitro maturation of oocytes. The viability and apoptosis of cumulus cells and oocytes were assessed using supravital nuclear staining and TUNEL assay, respectively. Results: Oocytes harvested follicles in both control and treatment II had a significantly lower percentage of metaphase II oocytes (MII) than the treatment I and III (23.5±3.1, 15.03±4.6 and 32.7±3.2, 25.5±4.6; respectively) (p<0.05). Viability of the cumulus cells reduced in treatment I, II and III (83.4, 83.3 and 77.7%) compared to control (86.9%), (p<0.05). The apoptotic index in cumulus and oocyte complexes in treatments I and III (10.7±0.8 and 15.3±0.8) was higher than in control and treatment II (6.7±0.5 and 9.7±0.5) (p<0.05). Conclusion: These results demonstrate that HP had a mild effect on cell death incidence in cumulus cells without any effect on oocyte. However, it can be used as a mechanical force to improve in-vitro maturation of oocytes derived from vitrified-warmed mouse ovaries.</div> انجماد شیشه ای, بلوغ آزمایشگاهی, فشار هیدرواستاتیک, مرگ سلولی, موش Vitrification, In-vitro maturation, Hydrostatic pressure, Cell death, Mouse 257 264 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-31-57&slc_lang=en&sid=1 Zahra Rashidi زهرا رشیدی No Fertility and Infertility Research Center, Kermanshah University of Medical Sciences, Kermanshah, Iran مرکز تحقیقات باروری و ناباروری، دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران Mehri Azadbakht مهری آزادبخت No Department of Biology, Faculty of Sciences, Razi University, Kermanshah, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه رازی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران Mozafar Khazaei مظفر خزاعی mkhazaei1345@yahoo.com Yes Fertility and Infertility Research Center, Kermanshah University of Medical Sciences, Kermanshah, Iran مرکز تحقیقات باروری و ناباروری، دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران