International Journal of Reproductive BioMedicine
International Journal of Reproductive BioMedicine
IJRM
Medical Sciences
http://ijrm.ir
1
admin
2476-4108
2476-3772
10.29252/ijrm
en
jalali
1391
4
1
gregorian
2012
7
1
10
3
online
1
fulltext
en
بیان مارکر های چند ظرفیتی در سلولهای گرانولوزا پس از قرار گرفتن در معرض عصاره سلولهای بنیادی جنینی و تغییردهندههای اپیژنتیک
Expression of pluripotency markers in human granulosa cells after embryonic stem cell extract exposure and epigenetic modification
Original Article
Original Article
<strong><span style="font-family:b mitra;">مقدمه</span></strong><span style="font-family:b mitra;">: تغییرات اپی­ژنتیک در یک سلول تمایز یافته می­تواند آن سلول سوماتیک را به سلول چند ظرفیتی تبدیل نماید. جهت القاء چند ظرفیتی می­توان از چند روش بهره جست. یکی از راه­های آسان القاء چند ظرفیتی استفاده از عصاره سلولی می­ باشد. </span><span dir="LTR"></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">هدف</span></strong><span style="font-family:b mitra;">: هدف از این تحقیق افزایش کارایی برنامه­ دار شدن مجدد سلول تمایز یافته­ای مانند سلول گرانولوزا را با استفاده همزمان از تغییر اپی­ژنتیک و عصاره سلولی افزایش بود. </span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">مواد و روش­ ها</span></strong><span style="font-family:b mitra;">: سلول­های گرانولوزای انسانی در محیط حاوی 5-آزا دزکسی سایتیدین و تریکستاتین </span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">A</span></span><span style="font-family:b mitra;">کشت داده شد.</span> <span style="font-family:b mitra;"> سپس سلول­ها در معرض عصاره سلول­های بنیادی موش قرار و در حضور فاکتور مهرکننده (</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LIF</span></span><span style="font-family:times new roman,serif;">)</span><span style="font-family:b mitra;"> با فیبروبلاست­های جنینی موشی کشت داده شدند. تست الکالین فسفاتاز و ایمونوهیستوشیمی جهت </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Oct4</span></span><span style="font-family:b mitra;">، </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Sox2</span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Nanog</span></span><span style="font-family:b mitra;"> انجام شد. این تست­ها 24، 72 ساعت و همچنین یک هفته پس از در معرض قرارگیری با عصاره انجام شدند. </span><span dir="LTR"></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">نتایج</span></strong><span style="font-family:b mitra;">: سلول­های گرانولوزا 24 ساعت پس از در معرض قرارگیری با عصاره، فعالیت آنزیم الکالین فسفاتاز را نشان دادند و فعالیت این آنزیم تا 72 ساعت باقی ماند. بیان </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Oct4</span></span> <span style="font-family:b mitra;">نیز 24 ساعت پس از در معرض قرارگیری با عصاره نشان داده شد. سلول­ها پس از 72 ساعت توانستند </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Sox2</span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Nanog</span></span><span style="font-family:b mitra;"> را نیز بیان نمایند. بیان مارکرهای چند ظرفیتی پس از یک هفته متوقف شد. این نشان می­دهد که سلول­های گرانولوزا پس از در معرض قرارگیری با عصاره می­توانند مارکرهای چند ظرفیتی را بیان کنند. </span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">نتیجه­ گیری: </span></strong><span style="font-family:b mitra;">به نظر می­رسد که مهارکننده­های آنزیم متیل ترانسفراز (5-آزا دزکسی سایتیدین) و هیستون داستیلاز (تریکستاتین </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">A</span></span><span style="font-family:b mitra;">) می­توانند مارکرهای اپی­ژنتیک را پاک نموده تا مواد موجود در عصاره بتواند سلول را مجددا برنامه­ دار نماید.</span><span dir="LTR"></span>
<strong>Background:</strong> Epigenetic reprogramming of differentiated cells can modify somatic cells into pluripotential state. Pluripotency can be induced in somatic cells by several approches. One of the easy ways to induce pluripotency is the exposure of the somatic cells to the embryonic stem cell (ESC) extract. <strong>Objective:</strong> The objective of this study was to increase the efficiency of reprogramming of granulosa cell as a differentiated cell into pluripotential state by using epigenetic modifier agents and extract.<br>
<strong>Materials and Methods: </strong>The human granulosa cells were cultured in the medium containing 5-Aza-Deoxycytidine and trichostatin A. Then, the cells were exposed to mouse ESCs extract and co-cultured with mouse embryonic fibroblast in the presence of leukemia inhibitory factor (LIF). Alkaline phosphatase test and also immonohistochemistery staining for Oct4, Sox2 and Nanog were performed after 24 and 72 hours and 1 week.<br>
<strong>Results: </strong>The granulosa cells showed the alkaline phosphatase activity after 24 hours and the enzyme activity maintained for 72 hours. They also expressed Oct4 after 24 hours. The cells also expressed Sox2 and Nanog, 72 hours after exposure to the ESCs extract. The expression of the pluripotency markers decreased after 1 week. It seems that the extract can induce dedifferentiation in granulosa cells and they can express the stem cell markers. <strong>Conclusion: </strong> It seems that the inhibitors of the methyl transferase (5-Aza-Deoxycytidine) and histone deacetylase (trichostatin A) could delete the epigenetic markers and prepare the cells for reprogramming by administration of the extract.
عصاره عاری از سلول, سلولهای بنیادی جنینی, برنامه دار شدن مجدد, 5-آزا دزکسی سایتیدین, تریکستاتین A
Cell free extract, Embryonic stem cell, 5 - Aza-Deoxycytidine, Reprogramming, Trichostatin A
193
200
http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-31-50&slc_lang=en&sid=1
Tahereh
Talaei-Khozani
طاهره
طلایی خوزانی
t_talaee@yahoo.com