en اگزون 10 ژن CFTR در ناباروری مردان Original Article Original Article <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مقدمه</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">: حدود 10% ناباروری&shy;ها با آزوسپرمی انسدادی، مادرزادی بوده و به واسطه موتاسیون در ژن سیستیک فیبروزیس (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) ایجاد می</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">شوند. موتاسیون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> برای اولین بار در بیماران تایوانی مشاهده گردید.</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> این موتاسیون تنها علت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> نیست ولی ممکن است علت ناباروری در آنان باشد. </span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">: در این تحقیق ما بر آن بودیم تا یک روش سریع و قابل اعتماد را برای شناسایی موتاسیون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ‌طراحی کنیم.</span></span> <u><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></u><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش&shy; ها:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> 110بیمار (90 بیمار با آزوسپرمی غیرانسدادی و 20 </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">بیمار با آزواسپرمی </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">انسدادی) و 60 فرد نرمال وارد مطالعه شدند. موتاسیون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> با استفاده از روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RFLP-PCR</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> مورد بررسی قرار گرفت. این تکنیک برای اولین بار در این تحقیق به صورت کامل برای شناسایی موتاسیون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> طراحی گردید. تکثیر ناحیه واجد موتاسیون در اگزوژن 10 از ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CFTR</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> انجام شد. آنالیز </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RFLP</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> با استفاده از آنزیم </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">NdeI</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> انجام شد.</span></span><u><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></u><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ژنوتیپ همه‌ی نمونه&shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">DNA</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ژنومی با موفقیت انجام شد. آلل موتانت فقط در گروه بیمار مشاهده شد. ژنوتیپ واجد آلل موتانت (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) صرفا در گروه بیمار دیده شد. بین ژنوتیپ‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">GT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">TT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> هیچگونه ارتباط معنی &shy;داری دیده نشد (</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">0/437=</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">).</span></span><br> <strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه&shy;&nbsp; گیری:</span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> موتاسیون </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> صرفا در اگزوژن 10 ژن </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CFTR</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> گروه بیماران مشاهده شد، نه در گروه کنترل. این موتاسیون باعث غیاب دوطرفه مادرزادی وازودفران&shy;ها و در نهایت ناباروری می&shy;شود. این یک ارتباط قوی بین موتاسیون </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">M469I</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و ناباروری مردان را نشان می&shy;دهد. این یک موتاسیون در ژن </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CFTR</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> است که عامل </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CF</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> بوده و می&shy;تواند به عنوان یکی از علل&nbsp; ناباروری در نظر گرفته شود.&nbsp;</span></span></span> <strong>Background:</strong> About 10% of infertilities with obstructive azoospermia are congenital and caused by CF gene mutations. M469I mutation was observed for the first time in Taiwanese patients. This mutation not only causes CF, but also may be the origin of infertility too.<br> <strong>Objective: </strong>In this study, we aimed in designing a rapid, reliable RFLP-PCR procedure for detection of M469I mutation. The correlation and association between M469I mutation with infertility was investigated in this study.<br> <strong>Materials and Methods: </strong>one hundred ten patients (90 non obstructive and 20 obstructive) and 60 normal individuals were considered in this study. M469I mutation was detected using RFLP-PCR. This technique was completely designed for M469I genotyping, for the first time in our study. Amplification of the region surrounding the mutation in exon 10 of CFTR gene was then performed. RFLP analysis was carried out using the NdeI restriction enzyme. <strong>Results:</strong> All genomic DNA samples were genotyped successfully. M469I mutation was observed only in patients group. Therefore, genotype containing mutant allele (GT) has been detected only in the patients group. There was no significant correlation between GT and TT genotypes with infertility (p=0.437).<br> <strong>Conclusion:</strong> The M469I mutation has only been observed in Exon 10 CFTR gene of infertile patients, not in the control group. This mutation causes congenital bilateral absence of vaz deferens and finally infertility. This indicates a strong association between the M469I mutation and male infertility. Therefore, this is a CF-causing CFTR mutation that could be considered as a cause of infertility. ناباروری, سیستیک فیبروزیس, آزواسپرمی Infertility, Cystic fibrosis, Azoospermia 315 320 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-31-65&slc_lang=en&sid=1 Zohreh Hojati زهره حجتی z.hojati@sci.ui.ac.ir Yes Genetics Division, Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Isfahan, Isfahan, Iran بخش ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، ایران Somaye Heidari سمیه حیدری No Genetics Division, Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Isfahan, Isfahan, Iran بخش ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، ایران Majid Motovali-Bashi مجید متولی باشی No Genetics Division, Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Isfahan, Isfahan, Iran بخش ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، ایران