International Journal of Reproductive BioMedicine
International Journal of Reproductive BioMedicine
IJRM
Medical Sciences
http://ijrm.ir
1
admin
2476-4108
2476-3772
10.29252/ijrm
en
jalali
1391
7
1
gregorian
2012
10
1
10
5
online
1
fulltext
en
اثر سانتریفیوژ گرادیان ترکیبی بر جداسازی اسپرم های X- و Y- و یکپارچگی کروماتین
Effect of combined density gradient centrifugation on X- and Y- sperm separation and chromatin integrity
Original Article
Original Article
<strong><span style="background:white;"><span style="font-family:b mitra;">مقدمه: </span></span></strong><span style="background:white;"><span style="font-family:b mitra;">با</span></span><span style="font-family:b mitra;"> استفاده از روش<sub>­</sub>های مختلف شستشوی اسپرم، می توان آن­ها را با توجه به اندازه، تحرک، دانسیته، محتوای کروموزومی، نشانه های سطح سلولی و بار الکتریکی از هم جدا کرد. این روش ها همچنین اسپرم ­های با نقائص کروموزومی را کاهش می­ دهند و آن­ها را قبل ازاستفاده در تکنیک­های کمک باروری غربال می­ کنند.</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">هدف</span></strong><span style="font-family:b mitra;">: دراین مطالعه روش ­های گرادیان ساده آلبومین و پیوراسپرم و روش ترکیبی آن­ها</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(alb/PureSperm)</span></span></span> <span style="font-family:b mitra;">به منظور تعیین جنسیت و یکپارچگی کروماتین با استفاده از روش هیبریداسیون در جای فلورسانس </span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">FISH</span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">)</span></span><span style="font-family:b mitra;"> و کرومومایسین </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">A3</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> مقایسه و ارزیابی شده است.</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">مواد و روش­ ها:</span></strong><span style="font-family:b mitra;"> 30 نمونه مایع منی طبیعی با روش­های پیوراسپرم، گرادیان آلبومین وترکیب این دو روش</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(alb/PureSperm)</span></span></span> <span style="font-family:b mitra;"> آماده شدند. سپس تمام نمونه ها توسط </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">FISH</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و کرومومایسین </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">A3</span></span></span> <span style="font-family:b mitra;">رنگ آمیزی ونتایج با نرم افزار </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SPSS 11.5</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و آزمون کروسکال والیس ارزیابی گردیدند.</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></span><br>
<strong><span style="background:white;"><span style="font-family:b mitra;">نتایج: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;">نسبت اسپرم­های حاوی </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">X</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> در روش پیوراسپرم (5/677</span><span style="font-family:times new roman,serif;">±</span><span style="font-family:b mitra;">47/58) و اسپرم­های حاوی </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Y</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> در روش گرادیان آلبومین (3/83±46/13) کمی نسبت به نمونه­های نرمال (1:1) بیشتر بود، اما تفاوت معنی ­داری در نسبت اسپرم­ های حاوی </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">X</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> یا </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Y</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> در بین سه روش ذکر شده وجود نداشت. روش گرادیان آلبومین در مقایسه با پیوراسپرم و روش ترکیبی، اسپرم­های غیرطبیعی بیشتری را حذف نمود.</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></span><br>
<strong><span style="background:white;"><span style="font-family:b mitra;">نتیجه­ گیری: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;">روش جداسازی معمول مانند آلبومین و پیوراسپرم به میزان کم اسپرم­های </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">X</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Y</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> را از هم جدا می­کنند، اما این جداسازی به اندازه­ای نیست که کاربرد بالینی داشته باشد. همچنین روش ترکیبی</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">(alb/PureSperm)</span></span></span> <span style="font-family:b mitra;">هیچ مزیتی برای ارزیابی نسبت جنسیتی و یا یکپارچگی کروماتین در مقایسه با روش گرادیان ساده ندارد.</span><span style="color:#333333;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></span>
<strong>Background:</strong> It has been claimed that by using different washing methods, the sperms can be separated according to size, motility, density, chromosomal content and surface markings and charge. These methods also reduce sperm chromatin deficiencies and screen the sperms before applying in assisted reproduction techniques.<br>
<strong>Objective:</strong> This study compared simple density gradient methods and a combined method with albumin density gradient and PureSperm separation (alb/PureSperm) for sex preselection by double fluorescence in situ hybridization (FISH) versus chromomycin A3 staining to determine chromatin integrity. <strong>Materials and Methods: </strong>30 normal semen samples were prepared with PureSperm, albumin gradients and alb/PureSperm. All samples were then stained by FISH and chromomycin A3. The results were compared with SPSS 11.5 and the Kruskal-Wallis test.<br>
<strong>Results:</strong> The proportion of X-bearing spermatozoa by PureSperm separation (47.58±5.67) and Y-bearing spermatozoa by albumin gradient (46.13±3.83) methods were slightly higher than in putative normal sperm samples (1:1), but there were no significant differences in the X- or Y- bearing spermatozoa counts among the three methods. Albumin gradient separation tended to underestimate abnormal spermatozoa compared to PureSperm and combined alb/PureSperm.<br>
<strong>Conclusion: </strong>Routine separation methods slightly enriched X- or Y- bearing spermatozoa, but the differences were not significant for clinical purposes. The combined alb/PureSperm method had no advantages for assessing sex ratio or chromatin integrity compared to simpler gradient methods.
گرادیان آلبومین, هیبریداسیون درجای فلوئورسنت دو گانه, جداسازی اسپرم, نسبت جنسی, کروماتین اسپرم
Albumin gradient, Double-labeled fluorescence in situ hybridization, Sperm separation, Sex ratio, Sperm chromatin
435
440
http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-31-82&slc_lang=en&sid=1
Tahereh
Esmaeilpour
طاهره
اسماعیل پور
esmaeilt@sums.ac.ir