International Journal of Reproductive BioMedicine

en نسل جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی یزد (Yazd4- 7) بدون بیگانه به عنوان مرحله پیشین برای تولید خوب مواد خام با درجه بالینی از رویان های بدکیفیت: گزارش منابع آزمایشگاهی Xeno-free generation of new Yazd human embryonic stem cell lines (Yazd4-7) as a prior stage toward good manufacturing practice of clinical-grade raw materials from discarded embryos: A lab resources report Stem Cell & Cloning Original Article Original Article <div style="text-align: justify;">مقدمه: تولید سلولهای بنیادی رویانی انسانی در محیط عاری از محصولات حیوانی (Xeno-free) برای جلوگیری از آلودگیهای بالقوه حیوانی در کشت برای کاربردهای پیشرفته سلول درمانی مهم است. تولید سلولهای بنیادی رویانی انسانی در Xeno-free اولین گام برای تولید خطوط hESC با گرید کلینیکی است. هدف: تولید خطوط جدید hESC در شرایط Xeno-free. مواد و روش ها: این یک گزارش از منابع آزمایشگاهی است که در مرکز تحقیقات زیست سلولی بنیادی یزد، ایران از سال 1398 تا 1401 انجام شده است.  4 رده سلول بنیادی رویانی انسانی از 11 جنین، جنین تازه (10 n =) و جنین منجمد (1 n =) با کیفیت خیلی بد اهدا شده بدست آمد. در این مطالعه، تولید لاین‌های جدید سلولهای بنیادی رویانی انسانی یزد (Yazd4-7) در Xeno-free بدون استفاده از تکنیک ایمونوسرجری با کشت بلاستوسیست‌های بدون زونا دست‌نخورده به‌دست‌آمده از جنین‌های دیسکاردی بر روی سلول‌های YhFF#8 به‌ عنوان لایه تغذیهکننده در سیستم کشت میکرودراپ گزارش می‌کنیم. مشخصات بیان ژن پرتوانی ردههای سلولی با RT-PCR ارزیابی شد و بیان نشانگرهای سطحی خاص با استفاده از رنگآمیزی ایمونوفلورسنس تشخیص داده شد. تمایز آزمایشگاهی با استفاده از تشکیل اجسام شبه رویانی (EB) القا شد و مشخصات بیان ژن سه لایه زاینده و سلول‌های زایا با RT-PCR برای اثبات ظرفیت پرتوانی آنها بررسی شد. نتایج: در مجموع، با استفاده از سیستم کشت میکرودراپ و YhFF#8 به‌عنوان لایه تغذیهکننده با منبع انسانی، توانستیم 4 رده جدید سلول بنیادی رویانی انسانی (Yazd4-7) از 11 جنین دیسکاردی در شرایط کشت عاری از محصولات حیوانی تولید کنیم. نتیجه گیری: نتیجه این کار می‌تواند در آینده پایه‌ای برای کاربرد درمانی با استفاده از سلولهای آلوژنیکی باشد که از سلولهای بنیادی رویانی انسانی با گرید کلینیکی مشتق شدهاند.  </div> <div style="text-align: justify;">Background: Xeno-free generation of human embryonic stem cells (hESCs) is important to prevent potential animal contaminations in culture for advanced cell-based therapeutic applications. Xeno-free production of hESCs is the first step for manufacturing clinical-grade hESC lines. Objective: To produce new hESC lines in xeno-free condition. Materials and Methods: This lab resources report was conducted at Stem Cell Biology Research Center, Yazd, Iran from 2019-2022. 4 new hESC lines from 11 (10 fresh and 1 frozen) donated surplus discarded human embryos were established. In this study, we report the xeno-free derivation of new Yazd hESC lines (Yazd4-7), without using immunosurgery, by culturing intact zona-free blastocysts obtained from discarded embryos onto the YhFF#8 cells as a feeder layer in a microdrop culture system. The pluripotency gene expression profile of the cell lines was assessed by reverse transcription polymerase chain reaction and the expression of specific surface markers was detected using immunofluorescent staining. In vitro differentiation was induced using embryoid body formation and gene expression profile of 3 germ layers and germ cells. Reverse transcriptase polymerase chain reaction was investigated to prove their pluripotent capacity. Results: In sum, we have been able to generate 4 new hESC lines (Yazd4-7) from 11 discarded embryos in xeno-free culture conditions using a micro drop culture system and YhFF#8 as a human source feeder layer. Conclusion: The outcome of this work can be the foundation for the future allogeneic cell-based therapeutic application using clinical grade good manufacturing practice-derived hESC derivatives.  </div> تولید, سلول های بنیادی رویانی انسانی, فیبروبلاست های پوست ختنه انسانی, Xeno-free, تولید خوب, سلول های فیبروبلاست جنینی موشی. Derivation, Human embryonic stem cells, Human foreskin fibroblasts, Xeno-free, Good manufacturing practice, Mouse embryonic fibroblasts. 619 628 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-588-5&slc_lang=en&sid=1 Fatemeh Hajizadeh-Tafti fhajizade69@yahoo.com 0000-0003-3067-0534 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Jalal Golzadeh golzadehjalal@gmail.com 0000-0002-3425-9526 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Fatemeh Akyash fakyash@gmail.com 0000-0003-1277-4858 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Somayyeh-Sadat Tahajjodi s.tahajjodi@gmail.com 0000-0001-7386-3753 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Ehsan Farashahi-Yazd ehsanfarashahi@gmail.com 0000-0003-1122-0626 No Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Hassan Heidarian-Meimandi heidarianmh@gmail.com 0000-0001-6283-9053 No Abortion Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Behrouz Aflatoonian b.aflatoonian@ssu.ac.ir 0000-0002-7250-9813 Yes Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Department of Reproductive Biology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. Research and Clinical Center for Infertility, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran.