en ارزیابی دو روش استخراج DNA از پلاسمای مادری برای استفاده در تعیین جنسیت غیرتهاجمی جنین گاو Original Article Original Article مقدمه: DNA جنینی در پلاسما و سرم مادری بهعنوان یک ماده مفید برای تعیین جنسیت جنین قبل از تولد در طول سنین اولیه حاملگی نشان داده شده<br> است. اکنون روشهای غیرتهاجمی تشخیص پیش از تولد از هفته هشتم بارداری، با آزمایش نمونه خون مادری امکانپذیر است.<br> هدف: هدف از این مطالعه مقایسه دو روش استخراج DNA از پلاسمای مادری و به کارگیری آن در تستهای کلینیکی روتین جهت تعیین جنسیت جنین با<br> استفاده از روش غیرتهاجمی است.<br> مواد و روش ها: نمونههای خون مادری از 04 گاو آبستن که در طی هفتههای 8 تا 88 بارداری بودند جمع آوری شد. DNA الگو از 854 میکرولیتر<br> پلاسمای مادری با استفاده از دو روش نمکی و فنل کلروفرم استخراج گردید. جذب در - A260 و خلوص ) A260/A280 ) DNA استخراج شده بوسیله<br> اسپکتروفتومتر تعیین شد. سه میکرولیتر DNA استخراج شده بوسیله روش فنل کلروفرم بعنوان - DNA الگو مورد استفاده قرار گرفت. واکنش PCR برای<br> تکثیر قطعات کروموزومی X و Y ژنهای آمیلوژنین، TSPY و BC1.2 بهینه و تنظیم شد.<br> نتایج: تفاوت بین میانگین جذب DNA استخراج شده بوسیله روشهای فنل کلروفرم و نمکی در A260 <4/ معنی دار نبود ) 45 p (، درحالیکه، اختلاف بین<br> میانگین خلوص ) A260/A280 ) DNA <4/ استخراج شده بوسیله روشهای فنل کلروفرم و نمکی معنی دار بود ) 440 p (. قطعه کروموزوم X در تمامی 04 نمونه<br> و قطعات کروموزومی Y در 55 نمونه پلاسمایی گاوهایی که گوساله نر باردار بودند تشخیص داده شد. حساسیت و اختصاصیت این تست 044 درصد و بدون هیچ<br> نتایج منفی و مثبت کاذب مشخص شد.<br> نتیجهگیری: نتایج این مطالعه نشان داد که روش فنل کلروفرم روشی ساده و موثر برای جداسازی و تفکیک DNA جنینی از پلاسمای مادری است. <strong>Background: </strong>Fetal DNA in maternal plasma and serum has been shown to be a useful material for prenatal fetal sex determination during early gestational ages. Non-invasive prenatal diagnosis is now possible at 8th week of pregnancy, by maternal blood sample testing.<br> <strong>Objective:</strong> The purpose of this study was to evaluate two DNA extraction methods from mother plasma and its routine clinical application in bovine fetus gender determination with non-invasive method.<br> <strong>Materials and Methods: </strong>Maternal blood samples were taken from 40 pregnant cows during the 8th-38th weeks of gestation. DNA was extracted from 350 &mu;l of maternal plasma with two salting-out and phenol-chloroform methods. The absorption in A260 and purity (A260/A280) of extracted DNA were detected by ultraviolet spectrophotometer. Three &mu;l of the extracted DNA with phenol-chloroform method was used as a template. The PCR reaction was carried out to amplify the fragments of X and Y chromosomes of amelogenin, TSPY and BC1.2 genes.<br> <strong>Results:</strong> The difference between the mean absorption of DNA extracted by phenol-chloroform method and salting-out method was not significant in A260 (p>0.05, p=0.3549), but the difference between mean purity (A260/A280) of DNA extracted by phenol-chloroform method and salting-out method was significant (p<0.001). X chromosome fragment was detected in all 40 samples and Y chromosome fragments were detected in 25 plasma samples which were delivered a male calf. The sensitivity and specificity of test was 100% with no false negative and false positive results.<br> <strong>Conclusion:</strong> The results showed that phenol-chloroform method is a simple and sensitive method for isolation of fetal DNA in maternal plasma. استخراج DNA , پلاسمای مادری, جنین, تعیین جنسیت, غیر تهاجمی DNA extraction, Maternal plasma, Bovine fetus, Gender determination, Non-invasive 523 530 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-549-14&slc_lang=en&sid=1 Arash Davoudi آرش داودی arash1983@gmail.com Yes Department of Genomics and Animal, Agricultural Biotechnology Research Institute (ABRII), Branch of North Region of Iran, Rasht, Iran بخش ژنومیکس و جانوری، پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران ( ABRII)، منطقه شمال کشور، رشت، ایران Alireza Tarang علیرضا ترنگ No Department of Genomics and Animal, Agricultural Biotechnology Research Institute (ABRII), Branch of North Region of Iran, Rasht, Iran بخش ژنومیکس و جانوری، پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران (ABRII)، منطقه شمال کشور، رشت، ایران Seyed Ahmad Aleyasin سیداحمد آل یاسین No Department of Medical Biotechnology, National Institute for Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran پژوهشکده بیتکنولوژی پزشکی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری ( NIGEB )، تهران، ایران Abdolreza Salehi عبدالرضا صالحی No Department of Animal Sciences, Aburaihan College, Tehran University, Tehran, Iran بخش علوم دامی، پردیس ابوریحان، دانشگاه تهران، تهران، ایران Ramin Seighalani رامین صیقلانی No Department of Genomics and Animal, Agricultural Biotechnology Research Institute (ABRII), Branch of North Region of Iran, Rasht, Iran بخش ژنومیکس و جانوری، پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران ( ABRII)، منطقه شمال کشور، رشت، ایران Farideh Tahmoressi فریده طهمورسی No Department of Genomics and Animal, Agricultural Biotechnology Research Institute (ABRII), Branch of North Region of Iran, Rasht, Iran بخش ژنومیکس و جانوری، پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران ( ABRII )، منطقه شمال کشور، رشت، ایران