International Journal of Reproductive BioMedicine
International Journal of Reproductive BioMedicine
IJRM
Medical Sciences
http://ijrm.ir
1
admin
2476-4108
2476-3772
10.29252/ijrm
en
jalali
1391
10
1
gregorian
2013
1
1
11
12
online
1
fulltext
en
مقایسه توان تمایزی سلّول های بنیادی مزانشیمال حاصل از بافت چربی و مغز استخوان موش نر به سلّول های زایا
Comparison of differentiation potential of male mouse adipose tissue and bone marrow derived-mesenchymal stem cells into germ cells
Original Article
Original Article
<strong><span style="font-family:b mitra;">مقدمه: </span></strong><span style="font-family:b mitra;">مطالعات انجام شده در سال­های اخیر در زمینه تمایز سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های بنیادی به سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا نگرش دانشمندان را به مبحث باروری و ناباروری تغییر داده است. تولید داخل آزمایشگاهی سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا گام مهمی</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;"> در درک بهتر نحوه تکامل سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا جنس مذکر و مؤنث می­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">باشد. با توجه به مشکلات استفاده از سلّول­های بنیادی رویانی، یافتن سلّول­هائی با ویژگی­های پرتوانی و به دست آمده از یک بافت یا اندام بالغ می­تواند جایگزین مناسبی برای سلّول­های مذکور در آزمایشگاه باشد.</span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">هدف:</span></strong><span style="font-family:b mitra;"> هدف از این تحقیق به دست آوردن سلول­های زایا از منبع مناسبی به جای سلّول­های بنیادی رویانی و مقایسه توان تمایزی سلول­های بنیادی مزانشیمال حاصل از بافت چربی و سلول­های بنیادی مزانشیمال حاصل از مغز استخوان می­باشد.</span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">مواد و روش­ها: </span></strong><span style="font-family:b mitra;">پس از به دست آوردن جمعیت خالصی از سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BMMSCs</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ADMSCs</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">، جهت ارزیابی چند توان بودن این سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">ها با استفاده از محیط تمایزی به استئوبلاست و آدیپوسیت تمایز داده شدند. همچنین فلوسیتومتری جهت بررسی مارکرهای سطحی سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های بنیادی مزانشیمال حاصل از بافت </span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">چربی و مغز استخوان (بیان دو مارکر </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD90</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">، </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD44</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و عدم بیان مارکرهای </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD45</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD31</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">) انجام شد. سپس این سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">ها در محیط­های القایی حاوی رتینوئیک اسید به مدت 7 روز به سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا تمایز داده شدند. آنالیز فلوسایتومتری، رنگ­آمیزی ایمونوفلوروسنس و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">real time PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> جهت برسی بیان مارکرهای رده سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا (</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Mvh</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">،</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DAZL</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">،</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STRA8</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SCP3</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">) انجام شد.</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">نتایج:</span></strong><span style="font-family:b mitra;"> هر دو نوع سلّول قابلیت تمایز به سلّول های استئوبلاست و آدیپوسیت را داشته و مثبت بودن مارکرهای سطحی سلّول­های بنیادی </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD90</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD44</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و منفی بودن مارکر آندوتلیال وسلّول­های خونی (</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD45</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CD31</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">) نشان داده شده است</span><span dir="LTR">.</span><span style="font-family:b mitra;"> آنالیز فلوسایتومتری، ایمونوفلوروسنس و </span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">real time PCR</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> بیان قابل توجه مارکرهای سلّول­</span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎‎‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">های زایا</span> <span style="font-family:b mitra;">(</span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Mvh</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">،</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">DAZL</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">،</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">STRA8</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"> و</span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SCP3</span></span></span><span style="font-family:b mitra;">) را نشان داده است.</span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;">نتیجه­ گیری: </span></strong><span style="font-family:b mitra;">این مطالعه نشان داد هرچند که سلّول­های زایای تمایز یافته از بافت چربی علاوه بر نمونه­گیری بسیار آسان، سریع­تر رشد و تکثیر یافتند، ولی میزان بیان مارکرهای سلّول­های زایای تمایزیافته از سلّول­های بنیادی مغز استخوان به طور معنی­داری از سلّول­های زایای تمایز یافته از بافت </span><span dir="LTR"><span style="font-family:b mitra;">‎</span></span><span style="font-family:b mitra;">چربی بیشتر بوده است.</span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span>
<strong>Background:</strong> Recent publications about differentiation of stem cells to germ cells have motivated researchers to make new approaches to infertility. In vitro production of germ cells improves understanding differentiation process of male and female germ cells. Due to the problem of using embryonic stem cells (ESC), it’s necessary the mentioned cells be replaced with some adult multi-potent stem cells in laboratories.<br>
<strong>Objective: </strong>The aim of this study was to obtain germ cells from appropriate source beyond ESC and compare differential potentials of adipocytes derived stem cells (ADMSCs) with bone marrow derived stem cells (BMMSCs).<br>
<strong>Materials and Methods:</strong> To find multi-potential entity, after providing purified ADMSCs and BMMSCs, differentiation to osteoblast and adipocyte was confirmed by using appropriate culture medium. To confirm mesenchymal lineage production superficial markers (expression of CD90 and CD44 and non-expression of CD45 and CD31) were investigated by flowcytometry. Then the cells were differentiated to germ cells in inductive medium containing retinoic acid for 7days. To evaluate germ cells characteristic markers [Dazl (Deleted in azoospermia-like), Mvh (Mouse vasa homolog gene), Stra8 (Stimulated by retinoic acid) and Scp3 (Synaptonemal complex protein 3)] flowcytometry, imunoflorescence and real time PCR were used.<br>
<strong>Results:</strong> Both types of cells were able to differentiate into osteoblast and adipocyte cells and presentation of stem cell superficial markers (CD90, CD44) and absence of endothelial and blood cell markers (CD31, CD45) were confirmative The flowcytometry, imunoflorescence and real time PCR results showed remarkable expression of germ cells characteristic markers (Mvh, Dazl, Stra8, and Scp3).<br>
<strong>Conclusion:</strong> It was found that although ADMSCs were attained easier and also cultured and differentiated rapidly, germ cell markers were expressed in BMMSCs significantly more than ADMSCs.
سلّول های بنیادی مزانشیمی, ناباروری, سلّول های زایا, اسید رتینوئیک.
Mesenchymal stem cells, Infertility, Germ cells, Retinoic acid
965
0
http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-31-9&slc_lang=en&sid=1
Maryam
Hosseinzadeh Shirzeily
مریم
حسین زاده شیرذیلی
sobhania@tums.ac.ir