International Journal of Reproductive BioMedicine

en داربست نانویی جدید بر پایه آلبومین سرم انسانی و نانوذرات فسفات کلسیم: مطالعه سم شناسی این داربست روی رده سلولی اسپرماتوگونیای موش The viability of mouse spermatogonial germ cells on a novel scaffold, containing human serum albumin and calcium phosphate nanoparticles Original Article Original Article مقدمه: در اسپرماتوژنز سلولها اسپرماتوگونی به گامتهای هاپلوئید تبدیل میشوند. نشان داده شده است که پروسه اسپرماتوژنز میتواند در شرایط آزمایشگاهی نیز انجام شود. اسپرماتوژنز در شرایط آزمایشگاهی دریچه جدیدی در درمان ناباروری مردان باز میکند. هدف: هدف این مطالعه سنتز داربست نانویی بر پایه آلبومین سرم انسانی و نانوذرات فسفات کلسیم و بررسی تأثیر آن بر رده سلولی اسپرماتوگونیا بود. مواد و روشها: نانوذرات کلسیم فسفات از طریق واکنش نیترات کلسیم و دی آمونیوم فسفات بدست آمد. جهت ساخت ماتریکس نانویی، نخست سریال غلظت نانوذرات تری کلسیم فسفات در آب مقطر تهیه و با آلبومین سرم انسانی مخلوط و بعد از ایجاد حباب فورا این مخلوط در بن ماری 100 درجه قرار داده شد. بعد از سنتز ماتریکس نانویی سوسپانسیون سلولی رده اسپرماتوگونی موشی تهیه گردید و به مدت 6 و 12 و 24 ساعت در مجاورت آن قرار گرفت. در نهایت میزان حیات سلولی و میزان آزاد شدن آنزیم لاکتات دهیدروژناز در مورد همه نمونهها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: سایز نانوذرات تریکلسیم فسفات سنتز شده و حفرات ماتریکس نانویی به ترتیب تقریبا بین 50 تا 100 نانومتر و 200 تا 500 میکرومتر بود. نتایج تست حیات سلولی و آزادسازی آنزیم نشان داد که غلظتهای مختلف نانوذرات تری کلسیم فسفات و زمانهای انکوباسیون آنچنان تأثیری بر این سلولها نداشت. نتیجهگیری: از این مطالعه قابل نتیجه گیری است که افزایش غلظت نانوذرات تری کلسیم فسفات در داربست سنتز شده نتوانست منجر به سمیت سلولی شود. از طرف دیگر افزایش زمان انکوباسیون منجر به افزایش مرگ سلولی گشت. در این مطالعه فهمیده شد که نه تری کلسیم فسفات و نه آلبومین هیچکدام      نمیتوانند از سطح دارست جدا شوند. در آینده بایستی رشد و تمایز این سلولها بایستی در دورههای زمانی بیشتر چک گردد. Background: In spermatogenesis, spermatogonial cells differentiate to the haploid gametes. It has been shown that spermatogenesis can be done at in vitro condition. In vitro spermatogenesis may provide an open window to treat male infertility. Objective: The aim of this study was to evaluate the effects of a novel scaffold containing human serum albumin (HSA)/tri calcium phosphate nanoparticles (TCP NPs) on the mouse spermatogonial cell line (SCL). Materials and Methods: First, TCP NPs were synthesized by reaction of calcium nitrate and diammonium phosphate at pH 13. Then, serial concentrations of TCP NPs were separately added to 500 mg/mL HSA, and incubated in the 100oC water for 30 min. In the next step, each scaffold was cut (2×2mm), placed into sterile well of microplate, and then incubated for 1, 2, and 3 days at 37oC with mouse SCL. After incubation, the cytotoxicity of the scaffolds was evaluated by different tests including 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay, lactate dehydrogenase (LDH) assay, vital staining, and cell counting. On the other hand, the release of TCP NPs and HSA from the scaffolds was measured. Results: Based on microscopic observation, the size of cavities for all scaffolds was near 200-500 μm, and the size of TCP NPs was near 50-100 nm. All toxicity tests showed that the increase of TCP concentration in the scaffold did not affect mouse SCL. It means that the percentage of cell viability, LDH release, vital cells, and cell quantity was 85%, 105%, 90%, and 110%, respectively. But, the increase of incubation time led to increase of LDH release (up to 115%) and cell count (up to 115%). Also, little decrease of cell viability and vital cells was seen when incubation time was increased. Here, no release of TCP NPs and HSA was seen after increase of TCP concentration and incubation time. Conclusion: It can be concluded that the increase of TCP concentration in HSA/ TCP NPs scaffold does not lead to cytotoxicity. On the other hand, the increase of incubation time leads to increase of mouse SCL cell death. In this study, it was found that TCP NPs and HSA could not release from the scaffolds. In future, both proliferation and differentiation of mouse SCL on HSA/TCP NPs scaffold must be checked over more wide incubation times. داربست سلولی, آلبومین سرم انسانی, نانوذرات فسفات کلسیم, سلول های بنیادین اسپرماتوگونیا. Cytotoxic effect, Scaffold, Human serum albumin, Calcium phosphate nanoparticles, Spermatogonial cell line. 141 148 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-257&slc_lang=en&sid=1 Mona Yadegar منا یادگار No Department of Biology, East Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، گرایش سلولی مولکولی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شرق، تهران، ایران Seyed Hossein Hekmatimoghaddam سید حسین حکمتی مقدم No Department of Laboratory Sciences, School of Paramedicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran گروه علوم آزمایشگاهی، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران Saeide Nezami Saridar سعیده نظامی سریدار No Department of Biology, Ashkezar Branch, Islamic Azad University, Ashkezar, Iran گروه زیست شناسی، گرایش سلولی مولکولی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، اشکذر، یزد، ایران Ali Jebali علی جبالی alijebal2011@gmail.com Yes Department of Biology, Ashkezar Branch, Islamic Azad University, Ashkezar, Iran گروه زیست شناسی، گرایش سلولی مولکولی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، اشکذر، یزد، ایران