International Journal of Reproductive BioMedicine

en مقایسه اثر سرم خون بند ناف با FBS در تکثیر سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و سلول های بنیادی مزانشیمی ماتریکس بند ناف Xeno-free culture condition for human bone marrow and umbilical cord matrix-derived mesenchymal stem/stromal cells using human umbilical cord blood serum Original Article Original Article مقدمه: اگرچه سرم خون جنین گاو (FBS) به طور گستردهای در آزمایشگاههای کشت سلول استفاده میشود، اما خصوصیاتی از جمله خطر انتقال عفونت و اثرات جانبی حساسیت زا استفاده آن را جهت کشت سلولها برای مصارف بالینی محدود کرده است. بنابراین تقاضا برای یک مکمل جایگزین با قابلیت کمک به رشد و تکثیر سلولها وجود دارد. هدف: جهت یافتن یک جایگزین مناسب برای FBS، این تحقیق به مقایسه قابلیت سرم خون بندناف با FBS در تکثیر سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان (BMMCs) و سلولهای بنیادی مزانشیمی ماتریکس بند ناف (hUCMCs) پرداخته است. مواد و روشها: خون بند ناف نوزادان سالم متولد شده به روش سزارین جمع آوری و سرم خون بند ناف جدا شد. سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و سلولهای بنیادی مزانشیمی ماتریکس بند ناف با بررسی مارکرهای سطحی توسط فلوسایتومتری، بررسی آلکالین فسفاتاز درون سلولی و تمایز به سلولهای استخوانی و چربی شناسایی شدند. هر کدام از سلولهای جدا شده در سه گروه جداگانه در محیط Iscove's Modified Dulbecco's Media (IMDM) کشت داده شدند. گروهها عبارت بودند از: 1) کشت سلول ها با سرم خون بند ناف. 2) کشت سلولها با FBS. 3) کشت سلولها بدون افزودن سرم. تکثیر   سلولها به کمک معرف WST-1 و رنگ آمیزی تریپان بلو بررسی شد.. نتایج: سلولهای گروه اول و دوم از نظر مرفولوژی و بروز خصوصیات سلولهای بنیادی مزانشیمی شبیه به هم بودند و نتایج حاصل از ارزیابی WST-1 و رنگآمیزی تریپان بلو تفاوت معنیداری بین تکثیر سلولهای کشت داده شده در حضور سرم خون بند ناف و FBS نشان نداد اما تفاوت معنیداری بین تکثیر سلولها در گروههای دارای سرم و گروه بدون سرم مشاهده شد. نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که سرم خون بند ناف انسان میتواند به طرز مؤثری تکثیر سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و سلولهای بنیادی مزانشیمی ماتریکس بند ناف را در محیط آزمایشگاه پشتیبانی کند و به عنوان یک جایگزین مناسب در مطالعات بالینی به کار رود. Background: Fetal bovine serum (FBS) is widely used in cell culture laboratories,risk of zoonotic infections and allergic side effects create obstacles for its use inclinical trials. Therefore, an alternative supplement with proper inherent growthpromotingactivities is demanded. Objective: To find FBS substitute, we tested human umbilical cord blood serum(hUCS) for proliferation of human umbilical cord matrix derived mesenchymal stemcells (hUC-MSCs) and human bone marrow-derived mesenchymal cells (hBMMSCs). Materials and Methods: Umbilical cord blood of healthy neonates, delivered byCaesarian section, was collected and the serum was separated. hUC-MSCs andhBM-MSCs were isolated and characterized by assessment of cell surface antigensby flow cytometry, alkaline phosphatase activity and osteogenic/adipogenicdifferentiation potential. The cells were then cultured in Iscove's ModifiedDulbecco's Medium (IMDM) by conventional methods in three preparations: 1- withhUCS, 2- with FBS, and 3- without serum supplements. Cell proliferation wasmeasured using WST-1 assay, and cell viability was assessed by trypan bluestaining. Results: The cells cultured in hUCS and FBS exhibited similar morphology andmesenchymal stem cells properties. WST-1 proliferation assay data showed nosignificant difference between the proliferation rate of either cells following hUCSand FBS supplementation. Trypan blue exclusion dye test also revealed nosignificant difference for viability between hUCS and FBS groups. A significantdifference was detected between the proliferation rate of stem cells cultured inserum-supplemented medium compared with serum-free medium. Conclusion: Our results indicate that human umbilical cord serum can effectivelysupport proliferation of hBM-MSCS and hUC-MSCs in vitro and can be used as anappropriate substitute for FBS, especially in clinical studies. مغز استخوان, تکثیر سلول, خون بند ناف, سلول های بنیادی مزانشیمی/ استرومال, بندناف, ژله وارتون. Bone marrow, Cell proliferation, Cord blood, Mesenchymal stem/stromal cells, Umbilical cord, Wharton jelly 567 576 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-116&slc_lang=en&sid=1 Azadeh Esmaeli آزاده اسماعیلی No Physiology Research Center, Institute of neuropharmacology, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran مرکز تحقیقات فیزیولوژی، پژوهشکده نوروفارماکولوژی، دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کرمان، ایران Mojgan Moshrefi مژگان مشرفی No Physiology Research Center, Institute of neuropharmacology, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran مرکز تحقیقات فیزیولوژی، پژوهشکده نوروفارماکولوژی، دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کرمان، ایران Ali Shamsara علی شمس آرا No Neuroscience Research Center, Institute of Neuropharmacology, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran مرکز تحقیقات علوم اعصاب، پژوهشکده نوروفارماکولوژی، دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کرمان، ایران Seyed Hasan Eftekhar-vaghefi سیدحسن افتخار واقفی No Department of Anatomy, Afzalipour School of Medicine, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran گروه علوم تشریحی، دانشکده پزشکی افضلی پور، دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کرمان، ایران Seyed Noureddin Nematollahi-mahani سید نورالدین نعمت اللهی ماهانی nnematollahi@kmu..ac.ir Yes Physiology Research Center, Institute of neuropharmacology, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran مرکز تحقیقات فیزیولوژی، پژوهشکده نوروفارماکولوژی، دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کرمان، ایران