International Journal of Reproductive BioMedicine
International Journal of Reproductive BioMedicine
IJRM
Medical Sciences
http://ijrm.ir
1
admin
2476-4108
2476-3772
10.29252/ijrm
en
jalali
1396
3
1
gregorian
2017
6
1
15
4
online
1
fulltext
en
تأثیر فاکتور مهارکننده لوسمی بر تکثیر سلولهای استرومایی آندومتر انسانی
و بروز ژن های مرتبط با پلوریپوتنسی
Leukemia inhibitory factor increases the proliferation of human endometrial stromal cells and expression of genes related to pluripotency
Original Article
Original Article
<strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مقدمه:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> با توجه به جمعیت کم از سلول­های انسانی مزانشیمی آندومتر در داخل بافت و کاربرد بالقوه خود در درمان و بافت مهندسی، بعضی از تحقیقات در گسترش خود در شرایط آزمایشگاهی متمرکز شده است</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">.</span></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> هدف این مطالعه بررسی تاثیر فاکتور مهار کننده لوسمی (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) بر تکثیر سلول‏های استرومایی آندومتر بود.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">موارد و روش­ها: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">در این مطالعه تجربی سلول‏های استرومایی آندومتر انسانی پس از پاساژ چهارم جدا شدند و به دو گروه کنترل وآزمون با </span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">تقسیم شدند. سلولهادر گروه آزمون در حضور 10 نانوگرم بر میلی لیتر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> کشت شدند</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">سلولهای در غیاب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شدند. </span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نرخ تکثیر با استفاده از آزمون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و مارکر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD90</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">توسط تکنیک فلوسایتومتری وبیان ژن‏های پرتوانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Oct4</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Nanog</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">، ژن شاخص تکثیری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCNA</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">و ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIFr</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> با روش کمی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Real time RT-PCR</span></span> <span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> در هر دو گروه آزمون و کنترل مورد بررسی قرار گرفت.</span></span><span dir="LTR"></span><br>
<strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج:</span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> نرخ تکثیر در سلول‏های بنیادی آندومتر تیمار شده با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و گروه کنترل به ترتیب 06/0</span></span><span style="font-size:10.0pt;">±</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">61/1، 17/0</span></span><span style="font-size:10.0pt;">±</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">17/1 بود و این نرخ در گروه تیمار شده با</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> بالاتر از گروه کنترل بود (05/0=</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">). درصد سلول­های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD90</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> مثبت در گروه کنترل 08/0</span></span><span style="font-size:10.0pt;">±</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">26/94% و در گروه تیمار با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> 37/0</span></span><span style="font-size:10.0pt;">±</span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">96/98% بود که به طور معنی داری افزایش داشت (05/0</span></span><span style="font-size:10.0pt;">≥</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">). میزان بیان تمام ژن‏های هدف در گروه تیمار شده با</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> بالاتر از گروه کنترل بود (04/0=</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">). </span></span><span dir="LTR"></span><br>
<strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه­ گیری:</span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> تحقیق حاضر نشان داد که </span></span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">LIF</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> تأثیر زیادی را روی تکثیر، بقا و حفظ خصوصیات پلوری پوتنسی سلول­های استرومایی آندومتر انسانی داشته و می­تواند استفاده کلینیکی و سلول درمانی داشته باشد.</span></span></span>
<strong>Background: </strong>Concerning the low population of human endometrial mesenchymal cells within the tissue and their potential application in the clinic and tissue engineering, some researches have been focused on their in vitro expansion.<br>
<strong>Objective:</strong> The aim of this study was to evaluate the effect of leukemia inhibitory factor (LIF) as a proliferative factor on the expansion and proliferation of human endometrial stromal cells.<br>
<strong>Materials and Methods:</strong> In this experimental study, the isolated and cultured human endometrial stromal cells from women at ovulatory phase aged 20-35 years, after fourth passage were divided into control and LIF-treated groups. In the experimental group, the endometrial cells were treated by 10 ng/ml LIF in culture media and the cultured cells without adding LIF considered as control group. Both groups were evaluated and compared for proliferation rate using MTT assay, for CD90 marker by flow cytometric analysis and for the expression of Oct4, Nanog, PCNA and LIFr genes using real-time RT-PCR.<br>
<strong>Results:</strong> The proliferation rate of control and LIF-treated groups were 1.17±0.17and 1.61±0.06 respectively and there was a significant increase in endometrialstromal cell proliferation following in vitro treatment by LIF compared to controlgroup (p=0.049). The rate of CD90 positive cells was significantly increased in LIFtreatedgroup (98.96±0.37%) compared to control group (94.26±0.08%) (p=0.0498).Also, the expression ratio of all studied genes was significantly increased in the LIFtreatedgroup compared to control group (p=0.0479).<br>
<strong>Conclusion:</strong> The present study showed that LIF has a great impact on proliferation, survival, and maintenance of pluripotency of human endometrial stromal cells and it could be applicable in cell therapies.
آندومتریوم, تکثیر سلولی, بیان ژن, فاکتور مهارکننده لوسمی, سلولهای استرومایی.
Endometrium, Cell proliferation, Gene expression, Leukemia inhibitory factor,Stromal cells.
209
216
http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-40&slc_lang=en&sid=1
Mojdeh
Salehnia
مژده
صالح نیا
salehnim@modares.ac.ir,mogdeh@dr.com