fa سلول های بنیادی مزانشیمی استرومال اندومتریوم در گوسفند: مطالعه ای برون تنی کاربردی Original Article Original Article <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">مقدمه: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">سلول&shy;های بنیادی مزانشیمی استرومال اندومتریوم (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) برای عملکرد، ترمیم و بازسازی رحم حیاتی هستند.</span></span><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">هدف: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">این پژوهش روش جداسازی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;ها را معرفی کرده و خصوصیات </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها را در میش</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بالغ و نابالغ مقایسه نموده است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">موارد و روش&shy;ها: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نمونه</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بافت اندومتریوم از رحم 10 میش از کشتارگاه جمع</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">آوری شد. سلول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های اندومتر رحم با استفاده از انکوباسیون سرما و سپس خرد کردن بافت و درمان با کلاژناز نوع </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">I</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> از بافت جدا شدند. سلول&shy;های جدا شده در محیط کشت سلولی کشت داده شده و سلول&shy;های چسبیده به فلاسک&shy;ها به عنوان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها جمع&shy;آوری و دوباره کشت داده شدند. برای شمارش سلول&shy;ها، زمان دو برابر شدن جمعیت (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PDT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) اندازه&shy;گیری شد و 10⁴&times;2/2 سلول در پاساژ 4 در پلیت&shy;های کشت 24 چاهکی قرار داده شدند تا نمودارهای رشد سلول&shy;های جداسازی شده مقایسه شود. واکنش زنجیره&shy;ای پلی&shy;مراز رونویسی معکوس (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">) برای شناسایی نشانگرهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD34</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD73</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> انجام شد. پتانسیل استخوانی شدن و چربی شدن سلول&shy;های جدا سازی شده با استفاده از آزمون تمایز سلولی انجام شد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج: </span></span></strong><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها به فلاسک&shy;ها چسبیدند و شکل دوکی به خود گرفتند. بر اساس یافته &shy;های شمارش سلولی و نمودارهای رشد، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها در میش&shy;های نابالغ به طور معنی&shy; داری بیشتر از گوسفندان بالغ تکثیر شدند. </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PDT</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> مربوط به</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;ها در میش</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های نابلغ در حدود 21 ساعت بود درحالیکه این زمان در گوسفندان بالغ 2 برابر بیشتر (45 ساعت) بود. آنالیزهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RT-PCR</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> نشان داد که</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC </span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;ها برای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD73</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> مثبت و برای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD34</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> منفی بودند. </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها به استئوبلاست و آدیپوسیت تمایز داده شدند.</span></span><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;"></span></span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه&shy;گیری: </span></span></strong><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">بر اساس خصوصیات سلول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:arial,sans-serif;"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;">های بنیادی مزانشیمی تایید شده در </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">EnMSC</span></span><span style="font-family:b mitra;"><span style="font-size:11.0pt;"> ها، آنها می&shy;توانند به عنوان نامزدی در سلول درمانی و پزشکی ترمیمی استفاده شوند.</span></span> <strong>Background: </strong>Endometrial mesenchymal stem stromal cells (EnMSCs) are critical for uterine function, repair, and regeneration.<br> <strong>Objective: </strong>This study introduced isolation technique of EnMSCs and compared the characteristics of EnMSCs in mature and immature ewes.<br> <strong>Materials and Methods:</strong> Endometrial tissue samples from the uterus of 10 ewes were collected from the slaughterhouse. Endometrial cells were isolated from tissue using cold incubation and then chopping and treating was performed with collagenase type I. Isolated cells were cultured in cell culture medium and then attached cells to flasks were harvested as EnMSCs and subcultured. To enumerate the cells, the population doubling time (PDT) was determined and 2.2&times;104 cells in passage 4 were seeded into 24-well culture plates to compare the growth curves of isolated cells. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed for detection of CD34 and CD73 markers. The osteogenic and adipogenic potential of isolated cells were determined using differentiation tests.<br> <strong>Results: </strong>EnMSCs adhered to the flasks and displayed spindle-shape. Based on findings of the cell count and the growth curves, the EnMSCs growth was significantly more prominent in immature ewes in comparison to mature sheep. The PDT of EnMSCs in immature ewes was about 21 hr whereas this time period was two times higher (45 hr) in mature sheep. RT-PCR analyses of EnMSCs were positive for CD73 and negative for CD34. EnMSCs were differentiated into osteoblasts and adipocytes.<br> <strong>Conclusion:</strong> Based on mesenchymal stem cells characters confirmed in EnMSCs, they can be a candidate for cell therapy and regenerative medicine. اندومتریوم, سلول های بنیادی مزانشیمی استرومال, تعیین خصوصیت, تمایز, گوسفند. Endometrium, Mesenchymal stromal stem cells, Characterization, Differentiation, Sheep 83 92 http://ijrm.ir/browse.php?a_code=A-10-549-97&slc_lang=fa&sid=1 Farnaz Ghobadi فرناز قبادی No Stem Cells Technology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات فن آوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Farhad Rahmanifar فرهاد رحمانی فر No Department of Basic Sciences, School of Veterinary Medicine, Shiraz University, Shiraz, Iran گروه علوم پایه، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شیراز، شیراز، ایران Davood Mehrabani داود مهربانی mehrabad@sums.ac.ir Yes Stem Cells Technology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات فن آوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Amin Tamadon امین تمدن No Stem Cells Technology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات فن آوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Mehdi Dianatpour مهدی دیانت پور No Stem Cells Technology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات فن آوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Shahrokh Zare شاهرخ زارع No Stem Cells Technology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات فن آوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Iman Razeghian Jahromi ایمان رازقیان جهرمی No Cardiovascular Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات قلب و عروق، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران