جمعه 14 اردیبهشت 1403
[Archive]
دوره 22، شماره 1 - ( 11-1402 )
جلد 22 شماره 1 صفحات 68-61 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Ethics code: IR.SSU.REC.1400.139
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Soheilipour F, Boozarpour S, Aghaei S, Farashahi Yazd E. The genetically modified human foreskin fibroblast cell line (YhFF#8) stably expressing Cas9 gene: A lab resource report. IJRM 2024; 22 (1) :61-68
URL: http://ijrm.ir/article-1-3175-fa.html
URL: http://ijrm.ir/article-1-3175-fa.html
دودمانه سلولی تغییر ژنتیکی یافته فیبروبلاست پوست ختنه‌گاه انسان (YhFF#8) با بیان پایدار ژن Cas9: یک گزارش منبع آزمایشگاهی. International Journal of Reproductive BioMedicine. 1402; 22 (1) :61-68
چکیده: (116 مشاهده)
مقدمه: ردههای سلولی بیانکننده پایدار Cas9(پروتئین 9 مرتبط با CRISPR) به عنوان ابزار ارزشمندی در تحقیقات ژنتیکی پدیدار شدهاند که کارایی سیستم CRISPR/Cas9 را افزایش داده و روشهای ویرایش ژن را ساده میکنند. این دودمانهای سلولی امکان ویرایش همزمان چندین ژن را فراهم کرده و زمان کلی ویرایش را کاهش میدهد.
هدف: این مطالعه با هدف ایجاد یک رده سلولی فیبروبلاست انسانی پایدار با قابلیت تبدیل ژنتیکی به شکل جهش یافته، به عنوان یک مدل سلولی برای یک بیماری ژنتیکی خاص انجام شد. خط سلولی ایجاد شده بررسی مکانیسمهای بیماری، آزمایش درمانهای بالقوه، و به دست آوردن بینش در مورد فرآیندهای مولکولی اساسی را تسهیل میکند.
مواد و روش‌ها: سلولهای 293LTV کلیه جنینی انسان (HEK293LTV) برای تولید ذرات شبهویروس مورد استفاده قرار گرفتند و سلولهای فیبروبلاست پوست ختنه‌گاه انسان یزد از سلولهای دسته 8 (YhFF#8) برای تغییرات ژنتیکی هدف قرار گرفتند. ترانزفکشن سلولهای HEK293LTV با DNA پلاسمیدی نوترکیب pCDH-Cas9 باعث تولید ذرات شبهویروسی شد. سلولهای YhFF#8 ترانزداکت شده با استفاده از آنتی‌بیوتیک پورومایسین تحت انتخاب قرار گرفتند. درخشش پروتئین فلورسنت سبز (GFP) در سلولهای ترانزداکت شده قبل و بعد از انتخاب آنتیبیوتیکی سلولها تصویربرداری شد. در ضمن سطح بیان نسبی ژن Cas9 در مقایسه با ژنهای GFP و GAPDH با روش کمی (qPCR) تعیین گردید.
یافته‌ها: این مطالعه صحت توالی کاست ژن Cas9 و فعالیت رونویسی آن را تأیید کرد. سلولهای YhFF#8 ترانزداکت شده، فلورسانس سبز نشان داده و با انتخاب آنتیبیوتیکی که منجر به خالصسازی تقریباً 100% سلولهای تبدیل شده شد. بیان ژن GFP با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس، امکان رصد زنده سلولهای YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR را در محیط کشت را فراهم کرد.
نتیجه‌گیری: سلولهای YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR، برچسب‌گذاری‌شده و مستعد برای انجام فرایند ویرایش ژنومی، منبع بهینه‌ای برای تولید ردههای سلولهای بنیادی پرتوان القایی برای تحقیقات زیست‌پزشکی آینده فراهم میکنند.
هدف: این مطالعه با هدف ایجاد یک رده سلولی فیبروبلاست انسانی پایدار با قابلیت تبدیل ژنتیکی به شکل جهش یافته، به عنوان یک مدل سلولی برای یک بیماری ژنتیکی خاص انجام شد. خط سلولی ایجاد شده بررسی مکانیسمهای بیماری، آزمایش درمانهای بالقوه، و به دست آوردن بینش در مورد فرآیندهای مولکولی اساسی را تسهیل میکند.
مواد و روش‌ها: سلولهای 293LTV کلیه جنینی انسان (HEK293LTV) برای تولید ذرات شبهویروس مورد استفاده قرار گرفتند و سلولهای فیبروبلاست پوست ختنه‌گاه انسان یزد از سلولهای دسته 8 (YhFF#8) برای تغییرات ژنتیکی هدف قرار گرفتند. ترانزفکشن سلولهای HEK293LTV با DNA پلاسمیدی نوترکیب pCDH-Cas9 باعث تولید ذرات شبهویروسی شد. سلولهای YhFF#8 ترانزداکت شده با استفاده از آنتی‌بیوتیک پورومایسین تحت انتخاب قرار گرفتند. درخشش پروتئین فلورسنت سبز (GFP) در سلولهای ترانزداکت شده قبل و بعد از انتخاب آنتیبیوتیکی سلولها تصویربرداری شد. در ضمن سطح بیان نسبی ژن Cas9 در مقایسه با ژنهای GFP و GAPDH با روش کمی (qPCR) تعیین گردید.
یافته‌ها: این مطالعه صحت توالی کاست ژن Cas9 و فعالیت رونویسی آن را تأیید کرد. سلولهای YhFF#8 ترانزداکت شده، فلورسانس سبز نشان داده و با انتخاب آنتیبیوتیکی که منجر به خالصسازی تقریباً 100% سلولهای تبدیل شده شد. بیان ژن GFP با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس، امکان رصد زنده سلولهای YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR را در محیط کشت را فراهم کرد.
نتیجه‌گیری: سلولهای YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR، برچسب‌گذاری‌شده و مستعد برای انجام فرایند ویرایش ژنومی، منبع بهینه‌ای برای تولید ردههای سلولهای بنیادی پرتوان القایی برای تحقیقات زیست‌پزشکی آینده فراهم میکنند.
نوع مطالعه: Original Article |
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
