شنبه 8 دی 1403
[Archive]
دوره 10، شماره 5 - ( 7-1391 )
جلد 10 شماره 5 صفحات 440-435 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Esmaeilpour T, Elyasi L, Bahmanpour S, Ghannadi A, Monabbati A, Dehghani F et al . Effect of combined density gradient centrifugation on X- and Y- sperm separation and chromatin integrity. IJRM 2012; 10 (5) :435-440
URL: http://ijrm.ir/article-1-303-fa.html
URL: http://ijrm.ir/article-1-303-fa.html
اسماعیل پور طاهره، الیاسی لیلا، بهمن پور صغری، قنادی علیرضا، منبتی احمد، دهقانی فرزانه و همکاران.. اثر سانتریفیوژ گرادیان ترکیبی بر جداسازی اسپرم های X- و Y- و یکپارچگی کروماتین. International Journal of Reproductive BioMedicine. 1391; 10 (5) :435-440
طاهره اسماعیل پور* 
1، لیلا الیاسی2 ، صغری بهمن پور2 ، علیرضا قنادی3 ، احمد منبتی4 ، فرزانه دهقانی2 ، مرجانه کازرونی5
1، لیلا الیاسی2 ، صغری بهمن پور2 ، علیرضا قنادی3 ، احمد منبتی4 ، فرزانه دهقانی2 ، مرجانه کازرونی5
1- گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران ، esmaeilt@sums.ac.ir
2- گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
3- دانشگاه آزاد اسلامی، لارستان، ایران
4- گروه پاتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
5- مرکز نازایی شیراز، شیراز، ایران
2- گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
3- دانشگاه آزاد اسلامی، لارستان، ایران
4- گروه پاتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
5- مرکز نازایی شیراز، شیراز، ایران
چکیده: (3612 مشاهده)
مقدمه: با استفاده از روشهای مختلف شستشوی اسپرم، می توان آنها را با توجه به اندازه، تحرک، دانسیته، محتوای کروموزومی، نشانه های سطح سلولی و بار الکتریکی از هم جدا کرد. این روش ها همچنین اسپرم های با نقائص کروموزومی را کاهش می دهند و آنها را قبل ازاستفاده در تکنیکهای کمک باروری غربال می کنند.
هدف: دراین مطالعه روش های گرادیان ساده آلبومین و پیوراسپرم و روش ترکیبی آنها(alb/PureSperm) به منظور تعیین جنسیت و یکپارچگی کروماتین با استفاده از روش هیبریداسیون در جای فلورسانس (FISH) و کرومومایسین A3 مقایسه و ارزیابی شده است.
مواد و روش ها: 30 نمونه مایع منی طبیعی با روشهای پیوراسپرم، گرادیان آلبومین وترکیب این دو روش(alb/PureSperm) آماده شدند. سپس تمام نمونه ها توسط FISH و کرومومایسین A3 رنگ آمیزی ونتایج با نرم افزار SPSS 11.5 و آزمون کروسکال والیس ارزیابی گردیدند.
نتایج: نسبت اسپرمهای حاوی X در روش پیوراسپرم (5/677±47/58) و اسپرمهای حاوی Y در روش گرادیان آلبومین (3/83±46/13) کمی نسبت به نمونههای نرمال (1:1) بیشتر بود، اما تفاوت معنی داری در نسبت اسپرم های حاوی X یا Y در بین سه روش ذکر شده وجود نداشت. روش گرادیان آلبومین در مقایسه با پیوراسپرم و روش ترکیبی، اسپرمهای غیرطبیعی بیشتری را حذف نمود.
نتیجه گیری: روش جداسازی معمول مانند آلبومین و پیوراسپرم به میزان کم اسپرمهای X و Y را از هم جدا میکنند، اما این جداسازی به اندازهای نیست که کاربرد بالینی داشته باشد. همچنین روش ترکیبی(alb/PureSperm) هیچ مزیتی برای ارزیابی نسبت جنسیتی و یا یکپارچگی کروماتین در مقایسه با روش گرادیان ساده ندارد.
هدف: دراین مطالعه روش های گرادیان ساده آلبومین و پیوراسپرم و روش ترکیبی آنها(alb/PureSperm) به منظور تعیین جنسیت و یکپارچگی کروماتین با استفاده از روش هیبریداسیون در جای فلورسانس (FISH) و کرومومایسین A3 مقایسه و ارزیابی شده است.
مواد و روش ها: 30 نمونه مایع منی طبیعی با روشهای پیوراسپرم، گرادیان آلبومین وترکیب این دو روش(alb/PureSperm) آماده شدند. سپس تمام نمونه ها توسط FISH و کرومومایسین A3 رنگ آمیزی ونتایج با نرم افزار SPSS 11.5 و آزمون کروسکال والیس ارزیابی گردیدند.
نتایج: نسبت اسپرمهای حاوی X در روش پیوراسپرم (5/677±47/58) و اسپرمهای حاوی Y در روش گرادیان آلبومین (3/83±46/13) کمی نسبت به نمونههای نرمال (1:1) بیشتر بود، اما تفاوت معنی داری در نسبت اسپرم های حاوی X یا Y در بین سه روش ذکر شده وجود نداشت. روش گرادیان آلبومین در مقایسه با پیوراسپرم و روش ترکیبی، اسپرمهای غیرطبیعی بیشتری را حذف نمود.
نتیجه گیری: روش جداسازی معمول مانند آلبومین و پیوراسپرم به میزان کم اسپرمهای X و Y را از هم جدا میکنند، اما این جداسازی به اندازهای نیست که کاربرد بالینی داشته باشد. همچنین روش ترکیبی(alb/PureSperm) هیچ مزیتی برای ارزیابی نسبت جنسیتی و یا یکپارچگی کروماتین در مقایسه با روش گرادیان ساده ندارد.
واژه‌های کلیدی: گرادیان آلبومین، هیبریداسیون درجای فلوئورسنت دو گانه، جداسازی اسپرم، نسبت جنسی، کروماتین اسپرم
نوع مطالعه: Original Article |
فهرست منابع
1. Schenker JG. Gender selection: cultural and religious perspective. J Assist Reprod Genet 2002; 19: 400-410. [DOI:10.1023/A:1016807605886]
2. Yan J, Feng HL, Chen ZJ, Hu J, Gao X, Qin Y. Influence of swim up time on the ratio of X- and Y-bearing spermatozoa. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 2006; 129: 150-154. [DOI:10.1016/j.ejogrb.2006.02.020]
3. Sureau C. Gender selection: a crime against humanity or the exert fundamental right? Hum Repod 1999; 14: 867-868. [DOI:10.1093/humrep/14.4.867]
4. Classens OE, Oosthuizen CJ, Brusnicky J, Franken DR, Kruger TF. Fluorescent in situ hybridization evaluation of human Y-bearing spermatozoa separated by albumin density gradients. Fertil Steril 1995; 63: 417-418. [DOI:10.1016/S0015-0282(16)57381-6]
5. Flaherty SP, Michaliowsa J, Swann NJ, Dmowski WP, Mattews CD, Aitken RJ. Albumin gradients do not enrich Y-bearing human spermatozoa. Hum Reprod 1997; 12: 938-942. [DOI:10.1093/humrep/12.5.938]
6. Van Kooij RJ, Van Oost BA. Determination of sex ratio of spermatozoa with a deoxyribonucleic acid-probe and quinacrine staining: a comparison. Feril Steril 1992; 58: 384-386. [DOI:10.1016/S0015-0282(16)55226-1]
7. Johnson LA, Welch GR, Keyvanfar K, Dorfmann A, Fugger EF, Schulman JD. Gender pre selection in humans? Flow cytometric separation of X & Y sperm for the prevention of X-linked disease. Hum Reprod 1993; 8: 1733-1739. [DOI:10.1093/oxfordjournals.humrep.a137925]
8. Wang HX, Flaherty SP, Swann NJ, Matthews CD. Assessment of separation of X-bearing Y-bearing sperm on albumin gradients using double-label fluorescence in situ hybridization. Fertil Steril 1994; 61: 720-726. [DOI:10.1016/S0015-0282(16)56652-7]
9. Flaherty SP, Matthews CD. Application of modern molecular techniques to evaluate sperm sex selection methods. Mol Hum Reprod 1996; 2: 937-942. [DOI:10.1093/molehr/2.12.937]
10. Han TL, Ford JH, Webb GC, Flaherty SP, Correll A, Matthews CD. Simultaneous detection of X- and Y-bearing human sperm by double fluorescence in situ hybridization. Mol Reprod Dev 1993; 34: 308-313. [DOI:10.1002/mrd.1080340311]
11. Karabinus DS. Flow cytometric sorting of human sperm microsort clinical trial update. Theriogenology 2009; 71: 74-79. [DOI:10.1016/j.theriogenology.2008.09.013]
12. Johnson LA, Schulman JD. The safety of sperm selection by flow cytometry. Hum Reprod 1994; 9: 758-759. [DOI:10.1093/oxfordjournals.humrep.a138591]
13. McNutt TL, Johnson LA. Flow cytometric sorting of sperm: Influence on fertilization and embryo/fetal development in the rabbit. Mol Reprod Dev 1996; 43: 261-267.
https://doi.org/10.1002/(SICI)1098-2795(199602)43:2<261::AID-MRD16>3.0.CO;2-6 [DOI:10.1002/(SICI)1098-2795(199602)43:23.0.CO;2-6]
14. Merton JS, Haring RM, Stap J, Hoebe RA, Aten JA. Effect of flow cytometrically sorted frozen/thawed semen on success rate of in vitro bovine embryo production. IETS Annual Meeting, Nice, France; 1997.
15. Svalander PC, Lundin K, Holmes PV. Endotoxin level in percoll density gradient media used to prepare sperm for human IVF treatment. Hum Reprod 1995; 10 (Suuple.): 130.
16. Claaessens OE, Menkveld R, Harrison KL. Evaluation of three substitutes for Percoll in sperm isolation by density gradient centrifugation. Hum Reprod 1998; 13: 3139-3143. [DOI:10.1093/humrep/13.11.3139]
17. Mortimer D. Structured management as a basis for cost effective infertility care. In: The Male Gamete: From Basic Science to Clinical Applications. Gagnon C (ed). Cache River Press, Vienna, IL, USA; 1999.
18. Sun JG, Jurisicova A, Casper RF. Detection of deoxyribonucleic acid fragmentation in human sperm: correlation with fertilization in vitro. Biol Reprod 1997; 56, 602-607. [DOI:10.1095/biolreprod56.3.602]
19. Lopes S, Sun JG, Jurisicova A, Meriano J, Casper RF. Sperm deoxyribonucleic acid fragmentation is increased in poor quality sperm samples and correlates with failed fertilization in intracytoplasmic sperm injection. Fertil Steril 1998; 69: 528-532. [DOI:10.1016/S0015-0282(97)00536-0]
20. Bianchi PG, Manicardi G, Bizzaro D, Campana A, Bianchi U, Sakkas D. Use of the guanine-cytosine (GC) specific fluorochrome, chromomycin A3, as an indicator of poor sperm morphology. J Assist Reprod Genet 1996; 13: 246-250. [DOI:10.1007/BF02065944]
21. World Health Organization. laboratory manual for the Examination and processingof human semen. 5th Ed. Cambridge University Press; Cambridge; 2010.
22. Beernink FJ, Dmowski WP, Ericsson RJ. Sex preselection through albumin separation of sperm. Fertil Steril 1993; 59: 382-386. [DOI:10.1016/S0015-0282(16)55681-7]
23. Aleahmad F, Gourabi H, Zeinali B, Kazemi Ashtiani S, Baharvand H. Separation of X-and Y-bearing human spermatozoa by sperm isolation medium gradients evaluated by FISH. Reprod Biomed Online 2009; 18: 475-478. [DOI:10.1016/S1472-6483(10)60122-8]
24. Chen MJ, Guu HF, Ho ES. Efficiency of sex pre-selection of spermatozoa by albumin separation method evaluated by double-labeled fluorescence in-situ hybridization. Hum Reprod 1997; 12: 1920-1926. [DOI:10.1093/humrep/12.9.1920]
25. Aribarg A, Ngeamvijawat J, Chanprasit Y, Sukcharoen N. Determination of the ratio of X and Y bearing spermatozoa after albumin gradient method using double-labeled fluorescence in situ hybridization (FISH). J Med Assoc Thai 1996; 79 (Suppl.): 88-95.
26. Andersen CY, Byskov AG. Enhanced separation of X and Y bearing sperm cells by a combined density gradient centrifugation evaluated by fluorescence in situ hybridization of the Y-chromosome. Acta Obstet Gynecol Scand 1997; 76: 131-134. [DOI:10.3109/00016349709050068]
27. Madrid-Bury N, Fernández R, Jiménez A, Pérez-Garnelo S, Moreira PN, Pintado B, et al. Effect of ejaculate, bull, and a double swim-up sperm processing method on sperm sex ratio. Zygote 2003; 11: 229-235. [DOI:10.1017/S0967199403002272]
28. Kobayashi J, Oguro H, Uchida H, Kohsaka T, Sasada H, Sato E. Assessment of bovine X- and Y-bearing spermatozoa in fractions by discontinuous percoll gradients with rapid fluorescence in situ hybridization. J Reprod Dev 2004; 50: 463-469. [DOI:10.1262/jrd.50.463]
29. Wolf CA, Brass KE, Rubin MIB, Pozzobon SE, Mozzaquatro FD, De La Corte FD. The effect of sperm selection by Percoll or swim-up on the sex ratio of in vitro produced bovine embryos. Anim Reprod 2008; 5: 110-115.
30. Hendriksen PJ. Do X and Y spermatozoa differ in proteins? Theriogenology 1999; 52: 1295-307. [DOI:10.1016/S0093-691X(99)00218-6]
31. Rose GA, Wong A. Experiences in Hong Kong with the though & practice of the albumin column method of sperm separation for sex selection. Hum Reprod 1998; 13: 146-149. [DOI:10.1093/humrep/13.1.146]
32. Sakkas D, Manicardi GC, Tomlinson M, Mandrioli M, Bizzaro, Bianchi PG, et al. The use of two density gradient centrifugation techniques and the swim-up method to separate spermatozoa with chromatin and nuclear anomalies. Hum Reprod 2000; 15: 1112-1116. [DOI:10.1093/humrep/15.5.1112]
33. Kheirollahi-Kouhestani M, Razavi S, Tavalaee M, Deemeh MR, Mardani M, Moshtaghian J, et al. Selection of sperm based on combined density gradient and Zeta method may improve ICSI outcome. Hum Reprod 2009; 24: 2409-2416. [DOI:10.1093/humrep/dep088]
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
