مقدمه: تولید سلولهای بنیادی رویانی انسانی در محیط عاری از محصولات حیوانی (Xeno-free) برای جلوگیری از آلودگیهای بالقوه حیوانی در کشت برای کاربردهای پیشرفته سلول درمانی مهم است. تولید سلولهای بنیادی رویانی انسانی در Xeno-free اولین گام برای تولید خطوط hESC با گرید کلینیکی است.
هدف: تولید خطوط جدید hESC در شرایط Xeno-free.
مواد و روش ها: این یک گزارش از منابع آزمایشگاهی است که در مرکز تحقیقات زیست سلولی بنیادی یزد، ایران از سال 1398 تا 1401 انجام شده است. 4 رده سلول بنیادی رویانی انسانی از 11 جنین، جنین تازه (10 n =) و جنین منجمد (1 n =) با کیفیت خیلی بد اهدا شده بدست آمد. در این مطالعه، تولید لاینهای جدید سلولهای بنیادی رویانی انسانی یزد (Yazd4-7) در Xeno-free بدون استفاده از تکنیک ایمونوسرجری با کشت بلاستوسیستهای بدون زونا دستنخورده بهدستآمده از جنینهای دیسکاردی بر روی سلولهای YhFF#8 به عنوان لایه تغذیهکننده در سیستم کشت میکرودراپ گزارش میکنیم. مشخصات بیان ژن پرتوانی ردههای سلولی با RT-PCR ارزیابی شد و بیان نشانگرهای سطحی خاص با استفاده از رنگآمیزی ایمونوفلورسنس تشخیص داده شد. تمایز آزمایشگاهی با استفاده از تشکیل اجسام شبه رویانی (EB) القا شد و مشخصات بیان ژن سه لایه زاینده و سلولهای زایا با RT-PCR برای اثبات ظرفیت پرتوانی آنها بررسی شد.
نتایج: در مجموع، با استفاده از سیستم کشت میکرودراپ و YhFF#8 بهعنوان لایه تغذیهکننده با منبع انسانی، توانستیم 4 رده جدید سلول بنیادی رویانی انسانی (Yazd4-7) از 11 جنین دیسکاردی در شرایط کشت عاری از محصولات حیوانی تولید کنیم.
نتیجه گیری: نتیجه این کار میتواند در آینده پایهای برای کاربرد درمانی با استفاده از سلولهای آلوژنیکی باشد که از سلولهای بنیادی رویانی انسانی با گرید کلینیکی مشتق شدهاند.